摘要
目的 黄芩素通过LncRNANKILA信号传导调控LPS诱导的A549人Ⅱ型肺泡上皮细胞中NF-κB通路及下游炎症因子的变化。基于LncRNANKILA/NF-κB信号通路探讨黄芩中的有效成分黄芩素对内毒素刺激所致炎症中NF-κB途径的调控作用，以期阐释黄芩有效成分黄芩素对LncRNANKILA/NF-κB介导的内毒素所致炎症的影响，进一步明确黄芩有效成分黄芩素调控LncRNANKILA/NF-κB信号通路的分子机制。 方法 1.采用CCK-8法检测黄芩素对A549人Ⅱ型肺泡上皮细胞增殖活性的影响，从而明确黄芩素的安全浓度范围，从而确定给药剂量。 2.黄芩素（20μM、40μM、80μM）与A549细胞预孵育1h后，加入LPS（终浓度10μg/mL）刺激24h。 3.采用核质分离的方法分离出细胞胞浆部分和细胞核部分，提取胞浆RNA、核RNA以及总RNA，观察LncRNANKILA在细胞浆与细胞核中的表达差异；探究LncRNANKILA经LPS刺激后的变化以及黄芩素对LncRNANKILA的调控作用，并用荧光原位杂交法对RT-qPCR的结果进行验证。 4.采用WesternBlot法检测LPS刺激后A549细胞中胞浆蛋白、核蛋白以及总蛋白中NF-κB-p50、NF-κB-p65、IκBα及其磷酸化的表达情况，考察黄芩素对LPS诱导的A549细胞中NF-κB通路的调控作用。 5.采用ASO干扰技术沉默A549细胞中的LncRNANKILA，黄芩素（20μM、40μM、80μM）预给药1h后，加入LPS刺激，24h后收集细胞及细胞上清。 6.采用WesternBlot法检测沉默NKILA后，A549细胞胞浆蛋白、核蛋白以及总蛋白中NF-κB-p50、NF-κB-p65、IκBα及其磷酸化的表达情况以及用ELISA法检测NF-κB下游炎症因子IL-6、TNF-α的表达情况，考察黄芩素通过LncRNANKILA信号传导对LPS诱导的A549细胞中NF-κB通路及其下游炎症因子的调控作用。1 结果 1.0.1μM~100μM的黄芩素对A549细胞增殖活性没有影响，最终确定20μM、40μM、80μM为本课题的给药剂量。 2.LPS刺激后，LncRNANKILA表达水平升高，黄芩素可降低LPS刺激导致的LncRNANKILA的表达上调。 3.LPS刺激后激活NF-κB通路，IκBα磷酸化增强，促使IκBα降解，从而促进NF-κB-p50、NF-κB-p65向核内转移。黄芩素给药后，可抑制LPS诱导的NF-κB通路的激活。 4.沉默NKILA后，NF-κB活性增强，NKILA对NF-κB具有负调控作用。沉默NKILA并给予LPS刺激可使NF-κB通路激活，IκBα磷酸化增强，导致IκBα降解，从而促进NF-κB-p50、NF-κB-p65向核内转移，进一步促进下游炎症因子IL-6和TNF-α的分泌。黄芩素给药后，可抑制上述活动，并呈现出一定的剂量依赖性。 结论 黄芩中有效成分黄芩素通过LncRNANKILA/NF-κB信号传导调控LPS诱导的A549人Ⅱ型肺泡上皮细胞内毒素所致炎症中NF-κB通路及下游炎症因子。其机制可能是黄芩素通过调控LncRNANKILA，抑制了NF-κB，从而抑制IκBα的降解，阻碍NF-κB-p50、NF-κB-p65向核内转移及下游炎症因子IL-6、TNF-α的释放来实现的。
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