摘要
类风湿性关节炎（RheumatoidArthritis,RA）为慢性炎症性全身性自身免疫性疾病，以进行性关节损伤功能障碍为特征。目前可用于RA治疗的药物价格昂贵，并且存在严重的副作用。制川乌具有祛风除湿、温经止痛的功效，用药历史悠久，临床上常用于治疗RA。 目的 本课题通过制备佐剂型关节炎（Adjuvant-inducedarthritis,AIA）模型，验证制川乌治疗RA的药效及蛋白靶点，旨在从炎症和免疫不同角度揭示制川乌治疗RA可能的作用机制，为川乌临床开发应用提供依据。 方法 本研究采用Wistar品系大鼠为研究对象。通过在大鼠足跖部位皮内注射10mg/ml的弗氏完全佐剂制备AIA动物模型。48只大鼠随机分为空白组、AIA组、甲氨蝶呤组、制川乌低剂量组、制川乌中剂量组和制川乌高剂量组，共6组，每组8只。诱发关节炎后第14天开始灌胃给药，给药过程持续28天。在整个实验过程中对各组大鼠足跖容积、体重和免疫器官指数进行测定；第42天时，对大鼠足跖部位进行拍照，麻醉后腹主动脉采血，收集各指标进行检测。 1.采用高效液相色谱方法检测制川乌中主要成分的含量； 2.采用苏木素和伊红染色法观察大鼠膝关节中滑膜组织病理改变情况； 3.采用酶联免疫吸附测定法测定大鼠血清中IL-1β和IL-17A炎症因子水平； 4.采用蛋白质免疫印迹法测定大鼠膝关节滑膜组织中的COX-1、COX-2、CXCR1、CXCR2、CXCR3蛋白水平； 5.采用实时荧光定量法测定大鼠膝关节滑膜组织中的COX-1、COX-2、CXCR1、CXCR2、CXCR3mRNA水平； 结果 与空白组相比，制备佐剂型关节炎模型后会引起注射足跖部的肿胀，造成大鼠体重增长速度下降。在第28天时，制川乌不同剂量组开始降低足肿胀情况（P＜0.01）；对体重无明显影响；与空白组相比，AIA组大鼠的脾脏系数（P＜0.01）明显升高；与AIA组相比，制川乌各剂量组大鼠的脾脏指数明显降低（P＜0.05）； 1.HPLC法分析结果表明，制川乌水煎液中主要成分为单酯型生物碱，其中苯甲酰新乌头原碱含量最高，苯甲酰乌头原碱次之，苯甲酰次乌头原碱含量最低； 2.与空白组相比，AIA组大鼠膝关节中出现滑膜组织增生，炎性细胞浸润，骨侵蚀等表现；与AIA组相比，制川乌不同剂量组淋巴细胞浸润、滑膜细胞增生、骨侵蚀情况均得到不同程度的改善； 3.与空白组相比，AIA组大鼠血清中的IL-1β和IL-17A的含量均明显升高（P＜0.01）；与AIA组相比，制川乌不同剂量组大鼠血清中IL-1β和IL-17A水平均明显降低（P＜0.01）； 4.AIA组大鼠滑膜组织中的COX-1、COX-2、CXCR1、CXCR2、CXCR3蛋白水平明显高于空白组（P＜0.01），制川乌各剂量组可明显下调上述蛋白水平（P＜0.01)。 5.与空白组相比，AIA组大鼠滑膜组织中的COX-2、CXCR1、CXCR2、CXCR3mRNA表达明显上调（P＜0.01），而COX-1mRNA表达没有变化（P＞0.05），与AIA组相比，制川乌各剂量组可明显降低COX-2、CXCR1、CXCR2、CXCR3mRNA水平，制川乌高剂量组对COX-1无显著性影响（P＞0.05）。 结论 1.制川乌能缓解AIA大鼠足肿胀情况，改善AIA大鼠滑膜组织病理情况，对类风湿性关节炎大鼠具有治疗作用； 2.制川乌可以通过下调炎症因子IL-1β、IL-17A发挥抗炎作用； 3.制川乌抗RA的作用机制可能与抑制花生四烯酸代谢途径和趋化因子信号轴通路有关。
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