摘要
为探明真菌对家蚕人工饲料的影响，本研究开展了养蚕蚕座环境来源真菌的分离和鉴定，对不同分离菌株在PDB培养基和家蚕人工饲料中的生长情况及繁殖后的酸碱度变化进行调查，并探索了库德里阿兹威氏毕赤酵母（Pichiakudravzevii）菌株影响饲料酸碱度的机制，综述如下。 1．采用常规分离纯化技术，从人工饲料育养蚕环境（蚕座）的饲料和蚕粪中分离筛选出7株经形态学和ITS序列鉴定方法确定为不同种属的真菌分离菌株，分别为酵母菌类的白地霉（Geotrichumcandidum）、假丝酵母（Candidasp.）和库德里阿兹威氏毕赤酵母（Pichiakudravzevii），霉菌类的溜曲霉（Aspergillustamarii）、黄曲霉（Aspergillusflavus）、黑曲霉（Aspergillusniger）和链孢霉（Neurosporasp.）； 2．对7株分离菌株在不同酸碱度PDB中的生长pH范围、酸性PDB中的生长规律和在3种家蚕人工饲料（AD、AD1和AD2）中的生长繁殖和饲料pH的变化情况进行了调查。结果显示7株分离菌株均能在pH值为2.00～10.00的液体培养基中生长，酵母菌类更适宜中性偏酸环境，使酸性培养基pH值在较小范围内浮动；霉菌类相比酵母菌类更适宜偏碱环境，可使酸性培养基pH值显著变化。在饲料上，假丝酵母菌在3种饲料均未见生长状，链孢霉仅在AD饲料上生长，其它分离菌株在3种饲料上均可见生长，且ATP总量显著上升，多数在5d达到最高。黑曲霉使饲料pH值从4.90±0.005、4.84±0.01和5.49±005分别降低至4.15±0.32(P=0.021)、4.04±0.07(P=0.000)和4.63±0.32(P=0.005)；其余分离菌株使3种饲料pH显著或极显著上升，黄曲霉接种AD2饲料15d的pH值达8.40±0.22(P=0.002); 3．将库德里阿兹威氏毕赤酵母（P.kudravzevii）菌株接种至家蚕人工饲料(AD3)，使饲料pH在5d内上升至7.50;接种至不同pH和葡萄糖含量的液体YPD中，其能适应繁殖基质pH的变化，碱化培养基质，使酸性培养基pH在6h内升高，在24h内上升到7.86(pH5.00)和8.26(pH6.00);培养基质中葡萄糖含量影响碱化，低浓度葡萄糖(＜0.6%)培养基碱化明显，高浓度葡萄糖(＞1.2%)培养基碱化现象消失。菌株接种至pH为3.00、5.00和7.00的不含葡萄糖YPD培养基中培养不同时间，对环境中氨气的释放量、碱化相关基因表达及谷氨酸脱氢酶的活性测定表明，与添加2%葡萄糖相比，不同pH固体培养基中氨气的释放量分别在培养24h(pH5.00)、4h(pH7.00)时极显著上升(P＜0.01)，随后持续升至最高值280mg/m3(pH7.00);谷氨酸脱氢酶活性逐渐升高，在12h(pH5.00)和24h(pH7.00)时达到最大值53.84U/mL和24.84U/mL，极显著高于对照组(P＜0.01)；液体培养基中碱化相关基因GDH2、DUR1，2和ATO3表达水平呈先升高后降低趋势，GDH2转录水平分别在8h(pH3.00)、4h(pH5.00)和8h(pH7.00)上调最高，极显著高于对照组(P＜0.01)，随后下降；ATO3转录水平分别在4h(pH3.00)、12h(pH5.00)和8h(pH7.00)显著上调最高(P＜0.05)，然后下降；DUR1，2转录水平均在8h极显著高于对照组(P＜0.01)。添加抗霉素A碱化程度下降甚至消失。
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