摘要
目的：探究黄连、吴茱萸配伍是否能够治疗非酒精性脂肪性肝病；探究黄连、吴茱萸配伍治疗非酒精性脂肪性肝病的作用机制；探索使用系统药理学对中药方剂的作用机制进行研究和解析的方法。 方法：从公共数据平台收集药物、成分、疾病和靶点数据，使用计算机技术构建药物-成分-靶点-疾病的网络，寻找药物和疾病的公共靶点，对药物和疾病靶基因进行GO和KEGG注释和富集分析，使用分子对接技术模拟验证药物对疾病相关信号通路的干预机制；10周高脂饲料喂养建立NAFLD实验大鼠模型，验证黄连吴茱萸与非酒精性脂肪性肝病公共靶点及信号通路。将建模成功的NAFLD大鼠随机分为7组，持续给予高脂饲料喂养，各组每日灌服、注射持续2周，分别为模型对照组、非诺贝特组（非诺贝特100mg/kg）、非诺贝特+PPARα拮抗剂组（非诺贝特100mg/kg，MK8861mg/kg）、连萸高剂量组（黄连、吴茱萸各1.58g/kg）、连萸中剂量组（黄连、吴茱萸各1.05g/kg）、连萸低剂量组（黄连、吴茱萸各0.53g/kg）、连萸高剂量组+PPARα拮抗剂组（黄连、吴茱萸各1.58g/kg，MK8861mg/kg）；空白对照组以基础饲料喂养。实验第13周末进行血清TC、TG、AST、ALT、ALP、γ-GT含量的测定及肝组织IL-6、TNF-α的ELISA检测，进行肝组织油红O、HE染色，及肝组织PPARα，PPARγ，CPT1-L，MCAD和LCAD的定量逆转录PCR和PPARα，CPT1-L，CPT2，MCAD，LCAD的免疫印迹试验。 结果： 1.收集了黄连、吴茱萸的40种化学成分及其147个作用靶标、NAFLD相关的70个相关靶点，以及黄连、吴茱萸与NAFLD的11个公共靶点。药物-成分-疾病-靶点网络和药物、疾病公共靶点的GO、KEGG富集结果表明黄连、吴茱萸对非酒精性脂肪性肝病具有多种能产生治疗效果的潜在作用机制，包括槲皮素干预PPAR信号通路以改善脂肪酸代谢等途径。分子对接的计算结果表明槲皮素的分子结构可以作为配体激活PPARα，从而调控PPAR信号通路。 2.黄连吴茱萸配伍水煎液可降低非酒精性脂肪性肝病大鼠的体质量、肝脏系数和附睾脂肪质量，减少血清总胆固醇和甘油三酯蓄积，降低血清ALT，AST，ALP及γ-GT水平，抑制肝组织IL-6和TNF-α等炎性因子的生成。油红O染色提示中剂量组能较好地减轻肝脏内脂肪含量，HE染色提示高剂量能较好改善肝脏水肿、出血、淤血等病理改变。 3.黄连吴茱萸配伍水煎液可上调PPARα，PPARγ，CPT1-L，CPT2，MCAD和LCAD的mRNA和蛋白质表达水平，其中，高剂量组具有最显著的作用。 结论： 1.系统药理学研究提示，黄连、吴茱萸和NAFLD的公共靶点在PPAR信号通路上相对集中，为动物实验验证提供了可行的方向。 2.动物实验结果表明，黄连吴茱萸配伍水煎液可减少血清总胆固醇和甘油三酯蓄积，抑制肝组织内炎性因子的生成，保护肝脏功能，减轻肝脏脂肪变性及纤维化，从而治疗非酒精性脂肪性肝病。 3.黄连吴茱萸配伍水煎液可通过激活PPAR通路来增加其下游蛋白CPT1-L、CPT2、MCAD、LCAD的表达，影响脂肪酸的β-氧化和过氧化物酶体β-氧化过程，阻断肝脏后续炎症损伤，缓解对肝脏的“二次打击”，从而治疗非酒精性脂肪性肝病。
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