摘要
灰霉病是浙贝母种植过程中发生的主要病害之一，严重影响浙贝母可入药的品质及其产量，而化学杀菌剂对灰霉病有极强抑制作用，但近年来化学农药过度或不当使用、病原菌抗性增强、土壤活力下降和环境污染等问题也日趋严重，因此新型绿色和保护环境的安全农药研发已成为未来重要发展方向。因此本研究以浙贝母灰霉病的绿色防治为研究目标，对以挖掘高效的化学药剂生防菌株为主要研究内容，取得了以下结果： 1.室内毒力筛选： 通过生长速率法测定氢氧化铜、百菌清、啶菌噁唑、腐霉利、嘧霉胺、异菌脲、百可得、苯醚甲环唑、咯菌腈、多菌灵等药剂对浙贝母灰霉病菌的抑制，其中异菌脲、百可得、苯醚甲环唑、咯菌腈、多菌灵对浙贝母灰霉病的抑制效果较好，咯菌腈对浙贝母灰霉病病菌毒力最高。 2.5种化学药剂处理后的浙贝母灰霉菌差异表达基因的鉴定： 基于转录组测序结果，共发掘1,965个新基因，1,356个得到功能注释；与对照组相比，百可得、咯菌腈、多菌灵、异菌脲、嘧霉胺处理组特有的差异基因表达数分别有213、778、38、576、93个；其中五种药剂处理组共同有309个基因发生差异表达。 3.浙贝母灰霉病拮抗细菌的研究： 通过平板梯度稀释法从健康的菊花根系土壤分离出30株细菌，通过平板对峙实验，筛选出对灰霉菌有效的生防细菌1株，该菌株对浙贝母链格孢菌和炭疽菌也具有抑制作用，经16SrDNA鉴定为芽孢杆菌。采用酸沉降法提取该芽孢杆菌的次生代谢产物，采用平板稀释法发现对灰霉菌具有抑制作用；并对该代谢产物其进行高温处理，发现其对灰霉菌仍具有抑制作用，此代谢物对高温不敏感。 4.浙贝母灰霉病拮抗真菌的的研究： 通过平板梯度稀释法从健康菊花叶片中分离内生真菌20株，筛选出一株拮抗真菌5-6-1，通过ITS序列分析、形态学观察，鉴定其为泛生漆斑菌；采用琼脂稀释法发现其非挥发性物质具有抑菌效果，挥发性物质则无明显抑菌效果。 上述研究内容的完成为浙贝母灰霉病绿色防控提供了重要基础，同时也对探索浙贝母灰霉菌对化学药剂的响应机制和相关基因的功能研究提供了基础数据。
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