摘要
研究目的： 1.通过中医传承辅助平台（V2.5）数据挖掘软件，分析总结2015~2020年中国知网有关中医药防治肝纤维化文献的用药规律和组方特色。 2.通过动物实验、离体细胞实验，探讨桂枝茯苓丸抗肝纤维化的疗效、作用特点及作用机制。明确桂枝茯苓丸是否通过TGF-β1/Smad2信号通路抑制肝星状细胞激活、抑制肝窦毛细血管化发挥防治肝纤维化的作用。 研究方法： 1.数据挖掘：收集中国知网2015~2020年肝纤维化中医药治疗文献的处方，运用中医传承辅助平台（V2.5）软件对肝纤维化处方中高频用药的四气、五味、归经及药物组方规律进行分析。 2.动物实验：60只清洁级雄性SD大鼠适应性喂养1周后随机分为6组，依次为正常对照组、模型对照组、桂枝茯苓丸低、中、高剂量组、大黄?虫丸组，采用四氯化碳诱导肝纤维化模型，治疗组造模同时予以桂枝茯苓丸低、中、高剂量和大黄?虫丸灌胃，空白组和模型组予以生理盐水灌胃，实验过程中观察记录大鼠一般情况，据体重变化调整灌胃量，治疗8周后予以处死，采集肝组织和血液标本，运用HE染色、Masson染色观察大鼠肝组织肝细胞损伤和纤维化程度，检测ALT、AST、PIIINP、TGF-β1、pSmad2、α-SMA、vWF、CD31、Col-Ⅲ等生物标志物的表达，扫描电镜观察肝窦内皮细胞窗孔及基底膜变化。 3.细胞实验：肝星状细胞（HSC-T6）进行体外培养，使用桂枝茯苓丸含药血清干预TGF-β1诱导的HSC-T6后进行细胞活力、增殖与侵袭能力检测，提取蛋白和mRNA后观察pSmad2、α-SMA、Col-Ⅲ、MMP-9、TIMP-1表达水平。 实验结果： 1.抗肝纤维化的中药以活血化瘀药为主，偏于应用四气寒、温、平，五味苦、干、辛，归经上入肝、脾、心三经药物为多； 2.动物实验研究结果：①桂枝茯苓丸可改善四氯化碳诱导肝纤维化SD大鼠一般情况；②桂枝茯苓丸可减少炎症细胞浸润，减少纤维组织增生，减轻肝重与肝脏系数；③桂枝茯苓丸可减少ATL、AST、PIIINP、TGF-β1/Smad2、α-SMA、Col-Ⅲ、vWF、CD31等肝纤维化相关生物学标志物表达；维持窗孔数目，抑制内皮下连续性基底膜形成。 3.细胞实验研究结果：桂枝茯苓丸含药血清减少了TGF-β1诱导后HSC-T6细胞的增殖与侵袭，减少pSmad2、α-SMA、Col-Ⅲ、TIMP-1表达，增加MMP-9表达。 实验结论： 1.近6年中医药对肝纤维化的治疗大法以活血化瘀为主，与桂枝茯苓丸组方规律基本一致； 2.动物实验研究：桂枝茯苓丸可改善肝纤维化大鼠的一般体征和肝组织损伤状况，对纤维化肝脏具有一定的保护作用；桂枝茯苓丸可抑制四氯化碳诱导肝纤维化SD大鼠模型中TGF-β1/Smad2的表达，从而减少HSCs激活；桂枝茯苓丸可减轻肝纤维化肝脏细胞外基质沉积；桂枝茯苓丸可减轻肝窦毛细血管化。综上，可能是桂枝茯苓丸“缓消癥瘕，化瘀通络”，防治肝纤维化的重要机制； 3.细胞实验研究：桂枝茯苓丸含药血清可抑制TGF-β1诱导下HSC-T6增殖与侵袭，抑制TGF-β1/Smad2信号通路表达，抑制HSCs活化，减少细胞外基质生成并促进其降解，改善肝纤维化。
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