摘要
[研究背景] 非霍奇金淋巴瘤(NHL)最多见的亚型——弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuselargeB-celllymphoma，DLBCL)是一组高度异质性的侵袭性淋巴瘤。根据基因表达谱(GEP)，DLBCL可分为三种类型:生发中心B细胞型(GCB)、活化B细胞型(ABC)及第三型（Type3）。R-CHOP方案的广泛应用极大地改善了GCB-DLBCL的生存，但对ABC-DLBCL患者的预后改善效果欠佳。ABC型DLBCL常见NF-κB通路持续激活，后者导致ABC-DLBCL细胞的增殖及抗凋亡能力增强，可能是ABC-DLBCL对化疗反应不佳。小分子IκB激酶抑制剂能选择性抑制ABC-DLBCL的增殖，提示NF-κB可能是治疗ABC-DLBCL的潜在靶标。蛋白酶体抑制剂硼替佐米通过抑制磷酸化IKB的降解和NF-κB通路活化发挥抗肿瘤功能，然而多项Ⅱ期研究结果显示硼替佐米并未明显改善Non-GCB患者的预后。尽管硼替佐米可以抑制NF-κB信号通路，但并非所有抑制剂在单一途径的不同步骤中都表现出相同的临床疗效。姜黄素是人工提取的化合物，可通过抑制NF-κB活化抑制多种肿瘤细胞的增殖。鉴于ABC-DLBCL对传统化疗疗效不佳，姜黄素及硼替佐米可能成为ABC-DLBCL的新型治疗方法。 [研究目的] 1.探讨姜黄素对ABC-DLBCL细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响及可能分子机制。 2.探讨姜黄素对ABC-DLBCL细胞硼替佐米的化疗敏感性的影响及可能机制。 [研究方法] 1.MTT法评价ABC-DLBCL细胞株的增殖活性。 2.AnnexinV-FITC/PI染色流式细胞术分析ABC-DLBCL细胞株的凋亡比例。 3.PI染色流式细胞术分析ABC-DLBCL细胞株的细胞周期 4.WesternBlot评价ABC-DLBCL细胞株PARP、NF-κB、IκBα/p-IκBα及caspase-3等蛋白的表达水平。 5.统计学分析:所有数据按均数±标准差的形式统计，t检验用于比较两样本均数的差异，多组样本则采用单因素方差分析进行比较。p＜0.05被认为具有统计学意义。使用软件SPSS23.0软件进行数据分析。 [研究结果] 1.和对照组相比，姜黄素能够抑制SuDHL2(F=12220.958，P＜0.001)、U2932(F=878.482，P＜0.001)和Riva（F=689.973，P＜0.001）细胞的增殖，48小时抑制效果较24小时更强（P＜0.05，P＜0.05，P＜0.05）。姜黄素还增加SuDHL2(F=194.127,P＜0.001)、U2932(F=323.341,P＜0.001)和Riva(F=459.88，P＜0.001)细胞的凋亡，提高SuDHL2(F=867.265，P＜0.001)、U2932(F=1167.251，P＜0.001)和Riva(F=1863.342，P＜0.001)细胞的G2/M期细胞比例。 2.在Riva、U2932细胞中，姜黄素单药组NF-κB/p65、p-IκBα蛋白的表达水平降低，CleavedPARP的表达水平升高。相较于姜黄素处理组，Caspase抑制剂Z-VAD联合姜黄素组CleavedPARP及Cleavedcaspase的表达水平明显降低，诱导的细胞增殖抑制(P＜O.001)及细胞凋亡比例(P＜0.001)也明显减少。 3.硼替佐米能够抑制SuDHL2(F=1606.305，P＜0.001)、U2932（F=24527.856，P＜0.001）和Riva（F=1059.159，P＜0.001）细胞的增殖。对比硼替佐米单药组，姜黄素联合硼替佐米组诱导的SuDHL2和Riva的细胞凋亡比例明显增高。在SuDHL2、Riva细胞中，硼替佐米组NF-κB/p65、p-IκBα蛋白的表达水平降低，CleavedPARP的表达水平升高。相较硼替佐米单药组，联合姜黄素组p-IκBα、NF-κB水平进一步降低，CleavedPARP表达水平也进一步升高。 [结论] 1.姜黄素能抑制ABC-DLBCL细胞株(SuDHL2、Riva、U2932)的增殖并诱导细胞凋亡，并在一定范围内呈剂量及时间依赖性， 2、姜黄素通过抑制ⅠκBα的磷酸化降解，抑制NF-κB/p65，最终经过Caspase凋亡途径，发挥杀伤ABC-DLBCL细胞株的作用。 3、姜黄素通过抑制NF-κB增强ABC-DLBCL细胞株对硼替佐米的敏感性。
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