摘要
目的：放射治疗在非小细胞肺癌患者的治疗中占据重要地位，然而放疗抵抗的产生极大程度地限制了放疗疗效，导致放疗失败以及肿瘤的复发转移。目前认为肿瘤干细胞是促进放疗抵抗的主要因素。SOX2是肿瘤干细胞特异性表达的一种转录因子，参与肿瘤的发生发展和细胞的干性维持，但其与非小细胞肺癌放疗抵抗之间的关系尚不清楚。本研究主要验证了非小细胞肺癌放疗抵抗细胞中SOX2的表达水平，探讨SOX2对非小细胞肺癌放疗敏感性和细胞干性表达等生物学性状的影响以及可能的作用机制。 方法：1.选取H460细胞株为研究对象，对H460亲本细胞（H460-PT）给予单次6Gy的X线照射，每周一次，经多次照射（总剂量72Gy）诱导形成放疗抵抗细胞（H460-RR），通过克隆形成实验检测细胞放疗敏感性变化，通过western blot和免疫荧光检测细胞内γH2AX表达水平从而验证放疗抵抗细胞株的放疗损伤修复能力。2.采用western blot和qRT-PCR技术分别检测H460-PT与H460-RR中肿瘤干细胞标志物CD133,ALDH和SOX2在蛋白和mRNA水平的表达情况，并通过成球实验检测两组细胞的成球能力。3.利用细胞划痕和Transwell实验检测H460-PT和H460-RR的迁移运动能力。4.使用慢病毒转染H460-PT构建SOX2过表达模型，检测SOX2上调后细胞放疗敏感性的变化。5.使用慢病毒转染H460-RR构建SOX2敲减模型，检测SOX2表达下调后细胞放疗敏感性的变化。6.通过western blot，qRT-PCR和成球实验检测SOX2表达水平的上调与下调对细胞干性标志物表达以及成球能力的影响，通过划痕和Transwell检测SOX2表达水平改变对细胞迁移能力的影响。 结果：1.成功构建放疗抵抗细胞株：累计照射剂量达72Gy的H460细胞表现出更强的放疗耐受能力，即为本研究预期的放疗抵抗细胞H460-RR（p＜0.05）。2.放疗抵抗细胞株呈现去分化特征：H460-RR中CD133，ALDH和SOX2的表达量在蛋白和mRNA水平均显著升高，成球能力也明显增强（p＜0.05）。3.放疗抵抗细胞株迁移能力显著增强（p＜0.05）。4.SOX2参与放疗抵抗的调控：过表达SOX2增强H460-PT放疗抗性和DNA损伤修复能力；SOX2表达下调后H460-RR放疗抗性出现下降趋势，DNA损伤修复能力降低。5.SOX2参与放疗抵抗细胞株去分化表型调控：SOX2上调促进肿瘤干细胞标志物CD133和ALDH的表达，并增强细胞的成球能力；敲减SOX2导致细胞CD133表达量下降，同时细胞成球能力呈现下降趋势。6.SOX2参与调控细胞迁移运动能力：SOX2表达上调促进H460-PT的迁移运动，SOX2表达下调减弱H460-RR的迁移运动能力。 结论：1.分次放疗可诱导非小细胞肺癌细胞放疗抵抗和SOX2的高表达；2.SOX2通过调节细胞去分化来促进非小细胞肺癌细胞的放疗抵抗。综上所述，SOX2参与调控非小细胞肺癌放疗敏感性，为克服非小细胞肺癌放疗抵抗提供了新的研究思路。
NETL