摘要
目的：挖掘温肺化饮细辛-干姜药对（XGHP）治疗COPD寒饮伏肺证大鼠的有效成分，关键靶点，作用途径，为临床研究与治疗提供理论依据。 方法：（1）利用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC–MS/MS）技术检测XGHP的有效成分，同时运用网络药理学方法及文献报道进行成分筛选及相关靶点的预测，并运用动物实验验证相关蛋白的表达； （2）40只SD雄性大鼠，分为正常组（10只）和模型组（30只），采用香烟烟雾+气管注射LPS+冷刺激复制COPD寒饮伏肺证模型，造模成功后随机分为COPD组、XGHP组（5.4g·kg-1·d-1），氨茶碱组（0.5g·kg-1·d-1），每组10只，治疗结束后，选择大鼠的肺组织，制作病理切片，并检测各组大鼠血清中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平； （3）基于高通量测序的转录组学分析各组肺组织之间的差异基因； （4）采用气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）分析各组肺组织间的差异代谢物； （5）整合转录组学和代谢组学数据，挖掘差异基因与差异代谢物之间的联系，从而分析XGHP治疗COPD大鼠的作用机制； （6）将药物有效成分与验证的核心靶点进行分子对接，根据配体与受体间的结合分数，预测核心靶点与有效成分之间的作用关系，并进一步估计XGHP治疗COPD过程中发挥作用的物质基础； （7）Western Blot技术验证核心蛋白的表达水平。 结果：（1）UPLC–MS/MS检测到XGHP中412个化合物，经口服利用度、类药性及文献报道筛选后得到有效化合物30个，主要包含细辛脂素、芝麻素、槲皮素等化合物，通过网络药理学预测及动物实验验证，结果显示XGHP能有效增加COPD大鼠的肺组织中PPARG蛋白的表达，并降低PTGS2蛋白表达； （2）组织病理学结果显示，正常组大鼠肺泡腔完整，炎症细胞较少，气道黏膜完整，COPD组肺泡融合、肺泡间隔破坏、腺体内分泌物明显、黏膜下杯状细胞增生、腺体肥大、肺间质及气道周围大量淋巴细胞和中性粒细胞浸润，XGHP组和氨茶碱组大鼠气管上皮黏膜损失少，腺体分泌物减少，炎症细胞浸润少，杯状细胞增殖少； （3）血清检测结果显示：与正常组比较，COPD大鼠血清中的TG、TC、LDL-C的水平显著降低（P＜0.05），HDL-C的水平显著升高（P＜0.05）；与模型组相比，XGHP组血清中TG、TC、LDL-C的水平显著升高（P＜0.05），HDL-C的水平显著降低（P＜0.05）； （4）转录组学分析中，通过比较正常组、XGHP组与COPD组之间的差异基因，取交集得到386个关键基因，这些基因主要富集在氧化磷酸化、AMPK信号通路； （5）代谢组学分析中通过比较XGHP组和COPD组，发现8个显著差异代谢物，这些代谢物主要富集在不饱和脂肪酸生物合成； （6）整合转录组学和代谢组学数据，发现差异基因与代谢物的联系主要涉及在FASN、SCD基因与油酸、棕榈酸、亚油酸的代谢物； （7）分子对接结果显示FASN、SCD和AMPK均与XGHP的有效化合物对接良好，其中对接分数较好的有L细辛脂素、芝麻素、芒柄花素、黄芩苷、紫铆素； （8）Western Blot结果显示XGHP能够降低COPD大鼠肺组织的pAMPK蛋白表达，增加FASN、SCD蛋白表达。 结论：（1）XGHP对COPD的肺组织具有保护作用，能够恢复大鼠血脂水平，其发挥治疗作用的物质基础可能是L细辛脂素、芝麻素、芒柄花素、黄芩苷、紫铆素；（2）XGHP可能通过AMPK信号通路，恢复FASN、SCD和pAMPK蛋白表达水平，从而增强不饱和酸的生物合成，恢复脂质代谢平衡，降低炎症反应；（3）XGHP在机体内可能通过增加线粒体氧化磷酸化、脂肪酸氧化、非颤抖性产热治疗寒饮伏肺证。
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