摘要
目的：本实验以高脂饮食诱导的胰岛素抵抗肥胖模型为研究对象，采用热量控制、电针、电针联合热量控制进行干预，以SIRT1和AMPK对肝脏脂代谢的调节作用为切入点，观察不同干预方法对胰岛素抵抗肥胖大鼠体重、Lee’s指数、血脂代谢、胰岛素敏感性、肝脏的组织形态学以及肝脏中SIRT1、AMPK、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）的蛋白表达，进而分析评价电针和热量控制调控胰岛素抵抗肥胖大鼠脂代谢和肝脏SIRT1/AMPK表达的效应。 方法：1.造模：5周龄SPF级Wistar雄性大鼠70只，按随机号码表法抽取15只给予普通饲料喂养，另55只给予高脂饲料喂养诱导胰岛素抵抗肥胖模型。喂养10周后，以大鼠体重、Lee’s指数评价肥胖模型；随机抽取普通饲料喂养组大鼠3只、高脂饲料喂养组大鼠12只行高胰岛素-正葡萄糖钳夹术测量葡萄糖输注速率（GIR），评价胰岛素敏感性。同时符合两项标准视为造模成功。分组：随机选取普通饲料喂养的10只大鼠分入正常组，并随机选取造模成功的大鼠分入模型组、热量控制组、电针组、针＋热控组，每组10只。 2.各组干预方法：正常组：普通饲料喂养；模型组：高脂饲料喂养；热量控制组：高脂饲料单独饲养，每天给予30%热量限制；电针组：高脂饲料喂养，给予电针干预；针＋热控组：给予电针和热量控制干预。电针干预方法：取穴：足三里、丰隆、关元、中脘；使用0.25×25mm一次性毫针，连接HANS LH202H型电针仪电极，参数设置：2Hz，1mA，连续波。每次电针15min，每周治疗3次，总疗程为8周。 3.指标检测：于干预的0、2、4、6、8周测量所有大鼠体重、肛鼻长，并计算Lee’s指数；于干预的第6周检测所有大鼠腹腔糖耐量（IPGTT）、腹腔胰岛素耐量（IPITT）；治疗结束后，每组随机抽取3只大鼠行“高胰岛素-正葡萄糖钳夹术”检测GIR，其余大鼠酶联免疫吸附实验（ELISA）检测胰岛素（Insulin）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、游离脂肪酸（FFA）含量，苏木精-伊红染色法（HE）检测肝脏的组织形态结构，免疫蛋白印迹法（WB）和免疫组化法（IHC）检测肝脏组织中SIRT1、AMPK、p-AMPK蛋白表达。 结果：1.高脂饲养8周对大鼠体重、Lee’s指数及GIR的影响：喂养8周后，与普通饲养组比较，高脂饲养组大鼠的体重、Lee’s指数增加（P＜0.01），GIR值降低（P＜0.01）。 2.电针联合热量控制对胰岛素抵抗肥胖大鼠体重、肥胖程度、血脂代谢及胰岛素敏感性的影响： （1）各组大鼠体重的比较：与正常组比较，模型组体重从干预第0周到第8周体重均增加（P＜0.01）。与模型组比较，干预第4周，热量控制组和针＋热控组体重开始出现差异（P＜0.05，P＜0.01）；干预第6周，电针组体重开始出现差异（P＜0.01），针+热控组体重减轻比热量控制组和电针组更明显（P＜0.05，P＜0.01）；干预第8周，三个干预组体重均明显减轻（P＜0.01），针+热控组体重减轻比热量控制组和电针组更明显（P＜0.01），热量控制组和电针组体重的差异无统计学意义（P＞0.05）。 （2）各组大鼠Lee’s指数的比较：与正常组比较，模型组大鼠Lee’s指数从干预第0周到第8周均增加（P＜0.01）。与模型组比较，干预第4周，针＋热控组Lee’s指数开始出现差异（P＜0.01）；干预第6周，热量控制组和电针组Lee’s指数开始出现差异（P＜0.01），针+热控组Lee’s指数降低比热量控制组和电针组更明显（P＜0.05，P＜0.01）；干预第8周，三个干预组Lee’s指数均明显降低（P＜0.01），针+热控组Lee’s指数降低比热量控制组和电针组更明显（P＜0.05，P＜0.01），热量控制组和电针组Lee’s指数的差异无统计学意义（P＞0.05）。 （3）各组大鼠血脂的比较：干预8周后，与正常组比较，模型组TC、TG、FFA含量升高（P＜0.01）；与模型组比较，三个干预组TC、TG、FFA含量降低（P＜0.01），针＋热控组TC、TG、FFA含量降低比热量控制组和电针组更明显（P＜0.05，P＜0.01）。 （4）各组大鼠胰岛素敏感性指标的比较： ①各组大鼠IPGTT的变化：在注射葡萄糖前（即0min），各组大鼠血糖组间差异无统计学意义（P＞0.05）。从注射葡萄糖开始至第30min，各组大鼠血糖均升高；第30min至120min，各组大鼠血糖均降低。与正常组比较，第30min至120min模型组血糖均升高（P＜0.01）。与模型组比较，第30min，三个干预组血糖降低（P＜0.01），三个干预组血糖的组间差异无统计学意义（P＞0.05）；第60min到120min，针+热控组血糖降低比热量控制组和电针组更明显（P＜0.01，P＜0.05），热量控制组和电针组血糖的组间差异无统计学意义（P＞0.05）。 ②各组大鼠IPITT的变化：在注射胰岛素前（即0min），各组大鼠血糖组间差异无统计学意义（P＞0.05）。在注射胰岛素后的60min内，各组血糖均降低；第60min后，各组血糖开始回升。第30min至第120min，模型组血糖均高于正常组。第30min，三个干预组血糖均低于模型组（P＜0.05，P＜0.01），但三个干预组血糖的组间差异无统计学意义（P＞0.05）。第60min至90min，三个干预组血糖均低于模型组（P＜0.05，P＜0.01），针＋热控组血糖低于热量控制组和电针组（P＜0.01，P＜0.05），热量控制组和电针组血糖的组间差异无统计学意义（P＞0.05）；第120min，三个干预组血糖均低于模型组（P＜0.01），针＋热控组血糖低于热量控制组（P＜0.05），热量控制组和电针组血糖的组间差异无统计学意义（P＞0.05）。 3.电针联合热量控制对胰岛素抵抗肥胖大鼠肝脏的组织形态学以及肝脏SIRT1、AMPK、p-AMPK蛋白表达的影响 （1）各组大鼠肝脏的组织形态学比较：正常组肝细胞索结构清晰，肝细胞形态规则，细胞核大而圆，居中，异染色质少而着色浅，能清晰看到核仁；模型组肝细胞索结构紊乱，肝细胞肿胀变形，细胞内可见许多大小不等的脂肪滴，细胞浆较少，并被挤压到细胞周围，细胞核被挤向一侧；热量控制组肝细胞索仍较模糊，肝细胞肿胀，肝细胞内以小泡型脂滴蓄积为主，但仍存在少许大泡型脂滴；电针组肝细胞索模糊，肝细胞肿胀，细胞内含有较多脂滴，细胞核受到挤压；针＋热控组肝细胞索较模型组、热量控制组、电针组清晰，细胞质较均匀，细胞内仍存在脂滴。 （2）WB检测各组大鼠肝脏SIRT1、AMPK、p-AMPK蛋白表达的结果比较： ①各组SIRT1的蛋白表达：与正常组比较，模型组SIRT1蛋白表达降低（P＜0.01）；与模型组比较，三个干预组SIRT1蛋白表达增加（P＜0.01，P＜0.05），热量控制组SIRT1蛋白表达增加比电针组更明显（P＜0.05），针＋热控组SIRT1蛋白表达增加比热量控制组和电针组更明显（P＜0.01）。 ②各组AMPK的蛋白表达：各组间的差异无统计学意义（P＞0.05）。 ③各组p-AMPK的蛋白表达：与正常组比较，模型组p-AMPK蛋白表达下降（P＜0.01）；与模型组比较，三个干预组p-AMPK蛋白表达增加（P＜0.01），热量控制组p-AMPK蛋白表达增加比电针组更明显（P＜0.01），针＋热控组p-AMPK蛋白表达增加比热量控制组和电针组更明显（P＜0.05，P＜0.01）。 （3）IHC检测各组大鼠肝脏SIRT1、AMPK、p-AMPK蛋白表达的结果比较： ①各组SIRT1的蛋白表达：与正常组比较，模型组SIRT1蛋白表达降低（P＜0.01）；与模型组比较，三个干预组SIRT1蛋白表达增加（P＜0.01），针＋热控组SIRT1蛋白表达增加比热量控制组和电针组更明显（P＜0.05，P＜0.01）。 ②各组AMPK的蛋白表达：各组AMPK蛋白表达的差异无统计学意义（P＞0.05）。 ③各组p-AMPK的蛋白表达：与正常组比较，模型组p-AMPK蛋白表达下降（P＜0.01）；与模型组比较，三个干预组p-AMPK蛋白表达增加（P＜0.01），针＋热控组p-AMPK蛋白表达增加比热量控制组和电针组更明显（P＜0.05，P＜0.01），且热量控制组p-AMPK蛋白表达量高于电针组（P＜0.01）。 结论：1.热量控制、电针、电针联合热量控制均能减轻胰岛素抵抗肥胖大鼠的体重及肥胖程度，降低血脂，改善腹腔葡萄糖耐量和胰岛素耐量，提高胰岛素敏感性，减少肝脏脂滴蓄积，改善肝脏的组织形态。 2.电针联合热量控制对胰岛素抵抗肥胖大鼠的体重及肥胖程度、血脂代谢、腹腔葡萄糖耐量和胰岛素耐量、胰岛素敏感性、肝脏SIRT1和p-AMPK蛋白表达的调控作用优于单纯热量控制和电针干预。 3.热量控制对肝脏SIRT1和p-AMPK蛋白表达的调节作用优于单纯电针干预。 4.综上所述，电针联合热量控制对于减轻体重、调节血脂代谢、提高胰岛素敏感性、改善高胰岛素血症、调控肝脏SIRT1和p-AMPK蛋白表达的效应更显著。
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