摘要
目的: 本研究旨在探究非萎缩性胃炎至早期胃癌发展过程中，免疫微环境中细胞组成、基因表达的动态变化，阐释免疫微环境中各细胞组分在胃癌进展中的作用，揭示胃癌发生发展机制。同时，分析调节性T细胞在胃癌及胃正常组织中的差异，构建胃癌诊断模型，寻找有效的分子标志物并对诊断模型进行验证。 方法: 1.通过单细胞转录组测序技术检测非萎缩性胃炎（non-atrophicgastritis，NAG）、萎缩性胃炎（atrophicgastritis，AG）和早期胃癌(earlygastriccancer,EGC)共6例标本的基因表达情况，探究胃癌进展过程中的细胞组成。 2.提取T细胞、B细胞、髓系细胞进一步降维聚类及细胞注释，探究胃癌进展过程其细胞亚群的组成及分布。 3.通过基因表达分析、通路富集分析等方法，描述胃癌进展过程中T细胞、B细胞、髓系细胞等基因表达、细胞功能、转录因子、发育轨迹的变化。 4.下载胃癌及胃正常组织单细胞测序数据，提取调节性T细胞(regulatoryTcell，Treg)进行分析，表征胃正常组织和肿瘤组织来源的Treg特征。 5.使用单细胞测序数据筛选胃癌进展中逐步变化的差异基因，下载胃癌及胃正常组织RNA-seq数据，使用LASSO（leastabsoluteshrinkageandselectionoperator，LASSO）回归构建胃癌诊断模型并进行验证。 结果: 1.T细胞、B细胞等免疫细胞在EGC中占比较高。成纤维细胞、主细胞等在胃癌进展中呈下降趋势，在胃癌进展过程中可能发生解痉多肽表达型化生。 2.T细胞主要来源于EGC样本，初始T细胞、辅助性T细胞等伴随胃癌发生呈增加趋势。在T细胞组成中，AG是NAG与EGC之间的中间状态，肠上皮化生则是接近EGC的状态。B细胞的数量和亚群间的多样性较T细胞少，B细胞及髓系细胞亚群在不同组织类型中分布不同。 3.细胞毒性T细胞和耗竭性T细胞的细胞毒性基因表达基本一致，但耗竭性T细胞抑制性基因表达更高。双阴性T细胞（doublenegativeTcell，DNT）在疾病进展过程逐渐表达浆细胞、CD8+T细胞标记基因，可能存在功能或表型转化。B细胞发育相关转录因子表达异常，其可能存在发育紊乱。Mastcellcl亚群高表达TNFAIP3、AREG等基因，可以促进肿瘤发生发展，其主要在疾病进展中后期存在。 4.Treg主要在肿瘤组织中存在，与细胞死亡、细胞周期等通路相关，在细胞间相互作用分析中，肿瘤组织中的Treg与其他细胞相互作用频率更低、强度更大，互作模式具有显著变化。 5.构建包含CLDN7、MDK、MTDH、PRAPI共4个基因的胃癌诊断模型，其诊断效能较好，在训练集及验证集中AUC(areaundercurve，AUC)值分别为0.9973714、0.9957786。 结论: 1.在Correa级联过程中，不同疾病进展阶段及不同患者之间细胞组成异质性较大，部分细胞呈现出伴随疾病发展的变化趋势。 2.在T细胞、B细胞、髓系细胞三种细胞中，T细胞数量最多、多样性复杂，三种细胞亚群在不同组织中分布具有差异。 3.T细胞、B细胞、髓系细胞在疾病进展过程中伴随着一定的表型转化，并且抑制性表型在EGC中更加明显。 4.Treg主要在胃癌肿瘤微环境中浸润，对肿瘤免疫起主要的调节作用。在胃正常及肿瘤组织中，Treg在细胞数量、基因表达、细胞功能、细胞互作等方面均存在显著差异。 5.成功构建胃癌诊断模型，其可以较准确的区分胃癌及正常组织样本。
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