摘要
目的：确定ATF6α(Activating transcription factor6α)在肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)细胞中的功能作用；确定ATF6α特异性抑制剂Ceapin-A7对HCC细胞体内外功能的作用；初步探索ATF6α调控HCC细胞功能的潜在生物学机制。 方法：利用ATF6α特异性小干扰RNA(siATF6),HBLV-h-ATF6shRNA1-ZsGreen-PURO慢病毒(shATF6)和小分子化合物Ceapin-A7对HCC细胞系中的ATF6α信号转导进行特异性抑制，并采用RT-qPCR和Western blot技术进行mRNA和蛋白水平的验证；通过CCK-8活力实验、细胞增殖实验、细胞克隆/悬浮实验和细胞迁移侵袭实验等验证ATF6α特异性敲低和Ceapin-A7对HCC细胞体外功能的作用；Western blot验证Ceapin-A7对ATF6α信号的体内外抑制作用；构建HCC异种移植小鼠模型，灌胃给予Ceapin-A7，验证Ceapin-A7对HCC细胞功能的体内作用；对siATF6处理的HepG2细胞进行转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)，并进行基因富集分析(Gene set enrichment analysis,GSEA)和KEGG通路分析，富集受ATF6α调控显著的信号通路，并采用RT-qPCR和Western blot进行基因和蛋白水平的验证。 结果：首先，在GEO(Gene Expression Omnibus)和TCGA(the Cancer Genome Atlas)数据库中对HCC患者进行数据挖掘发现与癌旁组织相比ATF6mRNA表达水平在HCC患者肿瘤中上调，并且随着HCC分期进展，ATF6mRNA表达水平增加。此外，与正常肝细胞L02相比，在三种HCC细胞系HepRG、HepG2和Huh7中，ATF6α蛋白水平表达上调。CCK-8活力实验、增殖实验、克隆悬浮实验和侵袭迁移实验显示，在对HCC细胞系中的ATF6α信号转导进行特异性抑制后，HCC细胞的活力、增殖速度、克隆和悬浮生长能力以及侵袭迁移能力均受到了一定水平的抑制。然后，药理学和安全性评价显示，在小鼠体内Ceapin-A7具有良好的药理学活性与安全性。最后，对siRNA处理的HepG2细胞进行转录组测序以及对差异基因进行富集分析发现，ATF6α通过调控蛋白分泌途径支持HCC发生发展。 结论：ATF6α在HCC中高表达并且与疾病进展密切相关，遗传学或药理学抑制ATF6α表达可以有效遏制HCC细胞在体内外的功能。机制上，ATF6α可能通过影响HCC细胞的蛋白分泌组从而促进肿瘤的发展。
NETL