摘要
海南蒲桃(EugeniajambolanaLam.，Syzygiumcumini(L.)Skeels)为桃金娘科蒲桃属常绿乔木。其种子在民间被用于治疗糖尿病。现代药理学研究表明，海南蒲桃种子具有抗糖尿病、抗氧化等作用，然而其生物活性成分及作用机制尚不明确，限制了对其进一步的开发利用。因此，为阐明海南蒲桃抗糖尿病作用的药效物质基础，本论文以海南蒲桃种子为研究对象，以体外活性筛选结果为导向，对海南蒲桃种子提取物的有效部位进行系统分离。利用多种柱色谱技术从海南蒲桃种子70％丙酮提取物中共分离79个化合物;采用各种谱学方法(NMR，IR，UV,MS，HRESIMS)结合UPLC-MS/MS以及理化性质确定单体化合物结构。海南蒲桃种子中分离鉴定的79个化合物包括间苯三酚类化合物19个(1-19)、倍半萜类化合物24个(20-43)、没食子酸和鞣花酸衍生物19个(44-62)，黄酮类化合物4个(63-66)、儿茶酚类衍生物1个(67)、内酯类化合物1个(68)、三萜类化合物7个(69-75)、甾体类化合物3个(76-78)、吡咯衍生物1个(79)。其中新化合物30个，包括化合物1-8，10-16，20-22，24-30，32-34，44和69。另外，16个化合物为首次从桃金娘科中报道，20个化合物为首次从蒲桃属中报道，28个化合物为首次从海南蒲桃植物中报道。 在化学成分研究基础上，利用体外筛选模型，对得到的多酚类化合物进行抗糖尿病活性评价。体外药理实验结果表明，海南蒲桃中的鞣花酸和没食子酸衍生物45-49和59对α-葡萄糖苷酶的抑制活性均显著优于阳性药阿卡波糖，其IC50值范围在5.0-21.2μM，其中化合物46-49和59的α-葡萄糖苷酶抑制活性为首次报道。抗蛋白糖基化活性筛选结果显示，鞣花酸和没食子酸衍生物45-50，53-56，59，60以及黄酮类化合物65对糖基化终端产物(AGEs)形成均有显著的抑制活性，其中化合物45-49及53-56的抗糖基化活性为首次报道;鞣花酸衍生物46-49，53，55和59在100μM浓度下，对AGEs生成的抑制率为68.1-82.9％，优于阳性药物氨基胍。进一步的作用机制研究表明，以上活性多酚类成分抑制AGEs形成的作用与其清除DPPH自由基及细胞内活性氧能力呈正相关。另外，所有参与测试的间苯三酚类化合物均表现出与阳性药相当的PTP1B抑制活性，IC50值为0.4-3.2μM;分子对接实验推测海南蒲桃中的间苯三酚类成分通过与PTP1B蛋白221位的精氨酸，217上的丙氨酸等多个结合位点竞争性结合从而发挥PTP1B抑制作用。 本论文的研究结果丰富了海南蒲桃次生代谢产物的结构类型，提示间苯三酚类化合物、鞣花酸和没食子酸衍生物是海南蒲桃种子抗糖尿病的主要活性成分，其防治糖尿病的作用机制与抑制PTP1B和α-葡萄糖苷酶活性以及降低AGEs生成相关。相关结果为促进海南蒲桃种子作为糖尿病防治药物进一步的开发利用提供了科学依据，为抗糖尿病活性先导化合物的发现提供了模板结构。
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