摘要
绿原酸（Chlorogenic acid，CGA）作为一种植物提取物，具有抗氧化、抗菌、抗炎、抗肿瘤和免疫调节等多种生物活性。通过胚蛋给养（In ovo feeding）技术，在胚期注射具有特定功能的物质可以改善家禽的健康和生产状况。本研究通过在鸡胚羊膜腔注射绿原酸，研究绿原酸对肉鸡生产和肠道健康的影响，旨在为肉鸡的绿色健康养殖提供技术支持，研究结果能为胚蛋给养的表观遗传调控机制提供初步的理论依据。 试验一：胚蛋给养绿原酸对雏鸡抗氧化性能的影响。选取优质的14胚龄哈伯德利丰肉鸡种蛋100枚，随机分为5个处理组，每组20个重复（20枚蛋），于17胚龄进行羊膜腔注射，除NC组外等剂量注射0.5mL。各处理组分别为：负对照组（NC）：不做任何处理；正对照组（PC）：注射生理盐水；4CGA组：注射4mg绿原酸；7CGA组：注射7mg绿原酸；10CGA组：注射10mg绿原酸。结果显示，各组的孵化率均为100%；与PC组相比，4CGA组的血清丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量有降低的趋势（P=0.0691），CGA处理组的血清超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）活力水平显著升高（P＜0.05）；在肝脏和肠道组织中，CGA处理组的抗氧化相关基因（Nrf2、HO-1、GSS、GPX7）mRNA表达均有所升高（P＜0.05）。结果表明，胚蛋注射绿原酸能提高雏鸡抗氧化酶的活力及基因表达，提高雏鸡的抗氧化能力。 试验二：胚蛋给养绿原酸对热应激肉鸡抗氧化性能的影响。选取优质的14胚龄爱拔益佳肉鸡种蛋300枚，随机分为5个处理组，每组6个重复，每个重复10枚，于17胚龄进行羊膜腔注射，除NC组外等剂量注射0.5mL。各处理组分别为：负对照组（NC）：不做任何处理；正对照组（PC）：注射生理盐水；4CGA组：注射4mg绿原酸；7CGA组：注射7mg绿原酸；10CGA组：注射10mg绿原酸。雏鸡出壳后，在每个重复中挑选6只健康且体重均匀的雏鸡进行饲养。在28～42日龄进行热应激处理（35±1℃，8h/d）。结果显示，各组的孵化率没有显著差异（P＞0.05）；各组全期的生产性能无显著差异（P＞0.05）；在35日龄时，4CGA组的血浆MDA含量显著低于NC组和其它绿原酸处理组（P＜0.05）。与NC组相比，4CGA组的血浆SOD酶活显著升高（P＜0.05），7CGA组的血浆谷胱甘肽（Glutathione，GSH）含量显著高于PC组和其它绿原酸处理组（P＜0.05）；在42日龄时，与NC组相比，4CGA组的血浆MDA含量显著降低（P＜0.05），4CGA组的血浆SOD酶活、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-Px）酶活和过氧化氢酶（Catalase，CAT）酶活显著升高（P＜0.05）；在35日龄时，与NC组相比，在十二指肠中，4CGA组的绒毛高度与隐窝深度的比值显著升高（P＜0.05）。在空肠中，4CGA组的绒毛高度显著提高（P＜0.05），隐窝深度显著降低（P＜0.05），绒毛高度与隐窝深度的比值显著升高（P＜0.05）；在42日龄时，与NC组相比，在十二指肠中4CGA组的绒毛高度显著升高（P＜0.05），在空肠中4CGA组的绒毛高度与隐窝深度的比值显著升高（P＜0.05）；42日龄抗氧化基因检测结果显示，在十二指肠中，与NC组和PC组相比，4CGA组核转录相关因子-2（Nuclear factor erythroid2-related factor2，Nrf2）、血红素氧合酶-1（Heme oxygenase1，HO-1）、谷胱甘肽合成酶（Glutathione synthetase，GSS）、超氧化物歧化酶1（Superoxide dismutase1，SOD1）mRNA表达显著升高（P＜0.05），超氧化物歧化酶2（Superoxide dismutase2，SOD2）mRNA表达有升高的趋势（P=0.0933）。与PC组相比，绿原酸处理组谷胱甘肽还原酶（Glutathione reductase，GSR）、谷胱甘肽过氧化物酶7（Glutathione peroxidase7，GPX7）mRNA表达显著升高（P＜0.05）。4CGA组CAT mRNA表达显著高于NC组（P＜0.05）；42日龄DNA甲基化相关酶的基因检测结果显示，在十二指肠中，与NC组和PC组相比，4CGA组甲基胞嘧啶双加氧酶1（Ten eleven translocation1，Tet1）、甲基胞嘧啶双加氧酶2（Ten eleven translocation2，Tet2）、DNA甲基转移酶3A（DNA-methyltransferase3alpha，DNMT3A）mRNA表达显著升高（P＜0.05）。与NC组相比，4CGA组DNA甲基转移酶1（DNA-methyltransferase1，DNMT1）mRNA表达有升高的趋势（P=0.0557）；42日龄热休克蛋白基因检测结果显示，在十二指肠中，与NC组和PC组相比，4CGA组和7CGA组热休克蛋白70（Heat shock protein70，HSP70）mRNA表达显著升高（P＜0.05）。在空肠中，与NC组相比，4CGA组热休克蛋白60（Heat shock protein60，HSP60）和HSP70mRNA表达显著降低（P＜0.05）。结果表明，胚期注射绿原酸能缓解热应激引起的肉鸡肠道组织氧化损伤，提高抗氧化酶的活力，促进十二指肠中抗氧化基因的表达，其中4CGA组的效果最好。十二指肠中DNA甲基化相关酶的mRNA表达增加，表明绿原酸对热应激肉鸡的抗氧化作用可能与表观遗传相关。 试验三：胚蛋给养绿原酸对热应激肉鸡肠道微生物的影响。选取优质的14胚龄爱拔益佳肉鸡种蛋180枚，随机分为3个处理组，每组6个重复，每个重复10枚，于17胚龄进行羊膜腔注射，除NC组外等剂量注射0.5mL。各处理组分别为：负对照组（NC）：不做任何处理；正对照组（PC）：注射生理盐水；CGA组：注射4mg绿原酸。雏鸡出壳后，在每个重复中挑选6只健康且体重均匀的雏鸡进行饲养。在28～42日龄进行热应激处理（35±1℃，8h/d）。42日龄盲肠微生物结果显示，在门水平上，NC组厚壁菌门（Firmicutes）的丰度约为40%，CGA组厚壁菌门的丰度约为53%，显著提高了32%（P＜0.05），软壁菌门（Tenericutes）的丰度提高了68%（P＞0.05），拟杆菌门（Bacteroidetes）的丰度降低了17%（P＞0.05），疣微菌门（Verrucomicrobia）的丰度降低了54%（P＞0.05）；在属水平上，NC组乳杆菌属（Lactobacillus）的丰度约为7%，CGA组乳杆菌属的丰度约为15%，提高了114%（P＞0.05），拟杆菌属（Bacteroides）的丰度提高了5%（P＞0.05），艾克曼菌属（Akkermansia）的丰度降低了54%（P＞0.05）；与NC组和PC组相比，CGA组的chao1指数和observed_otus指数显著提高（P＜0.05）。显著性差异分析结果显示，NC组的特征微生物是粪杆菌属（Faecalibacterium）、巴恩斯氏菌属（Barnesiella）、厌氧菌属（Anaerostipes）和脱铁杆菌属（Mucispirillum）。PC组的特征微生物是链球菌属（Streptococcus）、嗜血杆菌属（Haemophilus）、根瘤菌目（Rhizobiales）、沙雷氏菌属（Serratia）和放线菌属（Actinomyces）。CGA组的特征微生物是真杆菌属（Eubacterium)、柯林斯菌属（Collinsella）和异味杆菌属（Odoribacter）。结果表明，胚蛋注射绿原酸可提高盲肠中厚壁菌门和乳杆菌属的相对丰度，提高菌群的物种丰富度，并通过增加有益菌的数量和减少有害菌属来调节肠道菌群。 综上所述，胚蛋注射绿原酸有利于肠道的发育，能缓解热应激引起的肝脏和肠道组织氧化损伤，促进肠道尤其是十二指肠的抗氧化能力，其中4CGA组的效果最好。绿原酸对热应激肉鸡的抗氧化作用可能与表观遗传相关。同时，胚蛋注射绿原酸可提高盲肠中厚壁菌门和乳杆菌属的相对丰度，提高菌群的物种丰富度，并通过增加有益菌的数量和减少有害菌属来调节肠道菌群。
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