摘要
背景和目的: 胃癌是最具侵袭性的癌症之一，全球范围内每年约有100万新病例被确诊。根据WHO统计，2020年中国新发胃癌病例接近48万人。由于早期胃癌临床症状不典型且缺少广泛的初步筛查，大多数胃癌患者在初次诊断时已处于进展期。尽管采取积极有效的综合治疗方案（手术、放化疗和免疫治疗等），但胃癌患者的临床预后不容乐观，面临包括术后复发、癌性疼痛、恶病质、焦虑、抑郁等在内的一系列生理或心理问题。 上皮细胞-间充质转化（EMT）指上皮细胞在相关因素的作用下，经过一系列复杂的程序，转化为具有间质细胞特性的生物学过程。与EMT转化相关的蛋白分子包括E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白及波形蛋白Vimentin等。上皮来源的癌细胞通过EMT，丧失原有的细胞极性，转而获得更高的迁移和侵袭能力。已有文献表明，EMT在胃癌细胞的侵袭和转移过程中发挥重要作用，胃癌细胞通过EMT获得了更强的转移能力。阐明在胃癌中EMT的调控机制，对理解胃癌的发生发展和转移机制具有重要的价值。 IL-34是2008年发现的一种新的细胞因子，作为CSF的第二配体蛋白，IL-34与其功能受体结合，在调节细胞功能（分化、增殖、粘附）、代谢、血管生成、炎症和免疫反应方面发挥作用，IL-34结合受体后可触发了多条细胞内途径，通过介导细胞增殖、细胞周期和蛋白质的磷酸化等细胞进程影响肿瘤的发生与发展。IL-34作为一种细胞因子，可以分泌到细胞外，协同巨噬细胞集落刺激因子如M-CSF或CSF-1，与CSF-1受体结合，调节免疫相关细胞的生物学特性。IL-34自发现以来就不断被证明与神经系统疾病、自身免疫性疾病、感染性疾病等的发生发展密切相关。近年来，研究发现IL-34在包括甲状腺癌、结直肠癌、肝癌等多种肿瘤中发挥促癌作用。值得注意的是，研究发现包括IL-6、IL17a、IL-33及IL-34在内的多种细胞因子可介导肿瘤细胞的EMT进程，但是，目前关于IL-34是否可以调控胃癌增值及EMT仍不清楚。研究发现，在早期胃癌中，幽门螺杆菌感染与IL-34表达上升有关。因此，本研究旨在阐明IL-34与胃癌患者临床病理学特征间的关系以及IL-34是否在胃癌细胞增殖和EMT过程中发挥调节作用。 方法： 1、分别使用qRT-PCR和Westernblot方法，检测三株胃癌细胞系（AGS、HGC-27和MKN-45）和胃正常上皮细胞系（GES-1）中IL-34mRNA和蛋白表达水平。利用免疫组织化学染色方法，检测60例胃癌患者配对胃癌组织及癌旁正常组织中IL-34蛋白表达水平，并使用SPSS22.0软件分析IL-34表达水平与各临床病理学特征的相关性。 2、通过慢病毒感染和嘌呤霉素筛选，建立稳定敲减和过表达IL-34的AGS细胞系，并采用qRT-PCR和Westernblot方法进行验证。在体外实验中，分别采用CCK-8、克隆形成实验、细胞划痕实验和Transwell系统检测上述稳定细胞株的增殖、克隆形成、迁移以及侵袭能力。进一步的通过Westernblot方法检测IL-34对AGS细胞内EMT相关蛋白表达水平的影响。在体内实验中，利用裸鼠皮下移植瘤实验评估IL-34表达差异对胃癌移植瘤生长的影响。 结果： 1、与GES-1细胞比较，三株胃癌细胞系中IL-34蛋白和mRNA表达水平上升。与配对癌旁正常组织相比，60例胃癌组织中IL-34蛋白表达水平上升。IL-34表达与肿瘤大小、T分期、N分期、TNM分期和分化程度有关。 2、Westernblot和qRT-PCR结果表明成功建立稳定敲减和过表达IL-34的AGS细胞系。敲减IL-34表达抑制AGS细胞增殖和克隆形成，而过表达IL-34促进细胞增殖和克隆形成。在体内实验中，过表达IL-34促进裸鼠皮下移植瘤生长。敲减IL-34表达抑制AGS细胞迁移和侵袭能力，而过表达IL-34促进细胞迁移和侵袭能力。敲减IL-34表达促进AGS细胞内E-cadherin表达，但抑制EMT相关蛋白Vimentin和N-cadherin表达。过表达IL-34抑制AGS细胞内E-cadherin表达，但促进EMT相关蛋白Vimentin和N-cadherin表达。 结论： 与胃正常组织或细胞系比较，胃癌组织和细胞系中IL-34表达上升。IL-34可促进胃癌细胞增殖和克隆形成能力，并通过调节EMT相关蛋白表达促进胃癌细胞迁移及侵袭能力。IL-34作为一种潜在的分子标记物，有望为今后胃癌诊断及靶向治疗提供新选择。
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