摘要
目的：通过深低温冻存建立大鼠腹主动脉冻存损伤模型，观察不同浓度附子多糖（Fuzi-polysaccharides，FPS）对深低温冻存血管组织线粒体能量代谢的影响，探讨附子多糖对血管的保护机制。 方法：采用完全随机分组法将48只SD雄性大鼠分为对照组、冻存模型组（灭菌注射用水）、附子多糖干预组（FPS0.1mg/ml组、1mg/ml组、10mg/ml组、20mg/ml组），显微镜下获取腹主动脉。对照组取材后立即进入检测流程，冻存模型组及附子多糖干预组取材后经程序性降温—液氮保存（7天）—快速复温后进行指标检测。透射电镜观察线粒体内部超微结构；高效液相色谱（highperformanceliquidchromatography，HPLC）检测血管组织的ATP、ADP和AMP的含量，并计算能荷（energycharge，EC）；酶标仪检测线粒体蛋白浓度、ATP酶（Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、过氧化氢酶（CAT）活力和丙二醛（MDA）含量；紫外-可见光分光光度计检测线粒体呼吸链复合体I、II、III、IV活性。 结果：1.透射电镜观察线粒体内部超微结构变化：对照组线粒体呈规则的椭圆型，轮廓分明，外膜光滑完整，内嵴密集且清晰可见，基质分布均匀；与对照组比较，冻存模型组血管组织线粒体结构严重损伤，线粒体内外膜结构破裂溶解，线粒体基质外流，呈透明状。加入不同浓度附子多糖预处理后，线粒体超微结构损伤程度减轻，随着附子多糖浓度增加线粒体损伤程度减轻，呈浓度依耐性，其中FPS高浓度组较FPS低浓度组明显。 2.血管组织线粒体蛋白浓度：与对照组比较，冻存模型组中线粒体蛋白大量降解（Plt;0.01）；与冻存模型组比较，附子多糖干预组线粒体蛋白的降解程度明显减轻，FPS浓度越高，蛋白浓度越高，当浓度达到FPS10mg/ml时，溶液达到饱和状态，此时蛋白浓度最高（Plt;0.01）；与FPS10mg/ml组比较，FPS20mg/ml组线粒体蛋白浓度呈下降趋势，差异无统计学意义（Pgt;0.1）。 3.血管组织中ATP、ADP、AMP含量、EC值：与对照组比较，冻存模型组、FPS0.1mg/ml组和FPS1mg/ml组血管组织中ATP、ADP、AMP含量及EC均呈明显下降趋势（Plt;0.01）。与冻存模型组比较，FPS0.1mg/ml组和FPS1mg/ml组血管组织中ATP、ADP、AMP含量和EC差异无统计学意义（Pgt;0.05）。FPS可以提高ATP、AMP含量和EC，在20mg/ml以下时，随着浓度增加各组中ATP、AMP含量和EC值随之增加，呈浓度依赖性，从10mg/ml开始与冻存模型组比较差异有统计学差异（Plt;0.01）。与FPS10mg/ml组比较，FPS20mg/ml组ATP、ADP、AMP、EC差异无统计学意义（Pgt;0.05）。 4.血管组织线粒体呼吸链复合体活性、ATP酶、抗氧化物酶（SOD、GSH-PX、CAT）活力和MDA含量：与对照组比较，冻存模型组和附子多糖干预组血管组织中线粒体呼吸链复合体活性、ATP酶活力、抗氧化物酶活力均呈明显下降趋势（Plt;0.05），和MDA含量明显升高（Plt;0.05）。除FPS0.1mg/ml组外，附子多糖干预组中各浓度组复合体活性、ATP酶活力、抗氧化物酶活力均较冻存模型组明显上升（Plt;0.01），和MDA含量明显下降（Plt;0.01）差异有统计学意义。与FPS1mg/ml组比较，FPS10mg/ml组和FPS20mg/ml组复合体活性、ATP酶活力、抗氧化物酶活力均明显上升（Plt;0.05）（Plt;0.01），和MDA含量明显下降（Plt;0.05）（Plt;0.01）。当浓度增加到10mg/ml时，复合体活性、ATP酶活力、抗氧化物酶活力达峰值，再增加浓度时复合体活性、ATP酶活力、抗氧化物酶活力呈下降趋势，其中FPS10mg/ml组和FPS20mg/ml组差异无统计学差异（Pgt;0.05）。 结论：1.深低温冻存过程导致线粒体结构和功能障碍，影响血管组织能量代谢；2.FPS在深低温冻存过程中通过保护线粒体结构、改善线粒体功能障，调控能量代谢，对血管具有保护作用。
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