摘要
目的：黄芪-当归药对（芪归药对）在经典组方用药中，以李东垣之当归补血汤为代表，主治血虚发热证，然现代研究也已表明，其不同配伍比例功效有所差异，亦可表现为益气活血作用。本课题通过进一步研究芪归药对对气虚血瘀大鼠的益气活血作用，建立一定的质量控制标准并探讨其体外成分及体内吸收入血成分，以期为相关研究及临床合理用药提供科学依据。 方法：使用HPLC-DAD建立黄芪-当归（36g,3∶1）指纹图谱；选用SPF级成年雄性Wistar大鼠，随机分为空白组、模型组、3∶1组及对照药（5∶1）组，每日通过控制食量及凉水游泳制备气虚血瘀模型，同时各组每天给药（水）1次，给药组剂量10.2g?kg-1，模型组和空白组给予等量的蒸馏水，连续15天。观察大鼠一般状况；记录各组大鼠体质量，全血及血浆黏度，胸腺指数和脾脏指数，血清中ATP、ADP、vWF水平及ATP/ADP值；HE及扫描电镜观察血管内皮形态；采用UPLC-Q-ExactiveOrbitrap-MS分析水煎液成分及血清中的原型及代谢成分。 结果： 1.建立了芪归药对（36g,3∶1）指纹图谱，标定出吸收信号强、响应值大、稳定性好的共有峰14个。通过与单味药进行比对并对色谱峰进行归属，发现来源于黄芪的成分有8个，当归4个，同时来源于黄芪和当归有2个。 2.气虚血瘀组大鼠与空白组相比，体质量明显降低（Plt;0.01）；自主活动、逃避及攻击行为减少，饮水量减少，毛发易脱落无光泽，舌偏紫暗，粪便部分不成型，尾部发凉色淡并伴有青紫色瘀斑；全血（高切、中切、低切）黏度及血浆黏度均明显升高（Plt;0.01,Plt;0.05）；胸腺指数和脾脏指数均明显下降（Plt;0.01,Plt;0.05）；血清ATP含量显著降低（Plt;0.01），ADP含量显著升高（Plt;0.01），ATP/ADP值显著降低（Plt;0.01），vWF含量显著升高（Plt;0.01）；HE及扫描电镜结果显示，气虚血瘀组大鼠与空白组比较血管部分受损，表现为内膜结构紊乱，内皮凸起、缺损、粗糙，细胞粘附迁移明显。 经给药干预后，与模型组相比，3∶1及5∶1组均可改善大鼠的一般状态，体质量亦明显增加（Plt;0.01）；全血及血浆黏度结果显示：给药组均能降低大鼠全血（高切、中切、低切）黏度及血浆黏度，其中3∶1组可明显降低全血低切黏度（Plt;0.05）；胸腺指数及脾脏指数结果显示：给药组均能升高胸腺指数及脾脏指数，其中5∶1组能明显升高大鼠胸腺指数（Plt;0.05）；血清ATP、ADP水平结果显示：给药组均能升高ATP含量，降低ADP含量，升高ATP/ADP值，其中5∶1组对ATP、ADP水平作用更明显（Plt;0.05），两组均能显著升高ATP/ADP值（Plt;0.01）；血清vWF水平结果显示：给药组均能降低vWF水平，其中3∶1组vWF含量降低更明显（Plt;0.05）；HE及扫描电镜结果显示：给药组对血管内皮损伤均有不同程度的改善，内膜结构较整齐。 3.利用UPLC-Q-ExactiveOrbitrap-MS共鉴定出体外化学成分48个，主要包括黄酮类、皂苷类、苯酞类、有机酸、糖类和氨基酸及其衍生物；进一步对体内入血成分进行分析，共初步鉴定了11种原型成分吸收入血，包括4种黄酮类成分，4种苯酞类，1种皂苷类，1种有机酸，1种氨基酸；代谢产物7种，主要为黄酮及其苷类成分的代谢产物。 结论： 1.芪归药对3∶1和5∶1组对气虚血瘀模型大鼠宏观及微观检验指标均有改善作用，综合来看，3∶1组益气活血作用更加明显。 2.本实验为芪归药对（36g,3∶1）质量控制提供了参考方法，同时结合体外成分与体内入血成分研究，分析出包括芒柄花苷、芒柄花素、阿魏酸、黄芪甲苷等11种原型成分吸收入血，并鉴定出7种代谢产物。其中毛蕊异黄酮及毛蕊异黄酮葡萄糖苷虽未检测到原型成分，但有相应的代谢产物，推测以上成分可能是芪归药对发挥益气活血作用的物质基础。
NETL