摘要
目的：通过内毒素诱导的葡萄膜炎大鼠模型，探究脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）预处理减轻EIU大鼠眼部炎症过程中miR-146a和其作用靶点IRAK1、TRAF6及NF-κB P65的表达变化。 方法：SPF级Wistar大鼠随机分3组：正常组（normal control,NC），内毒素耐受组（endotoxin tolerance,ET），内毒素诱导的葡萄膜炎组（EIU），每组15只。通过连续5日每日给予ET组大鼠0.1mg/Kg LPS诱导内毒素耐受状态，正常组和EIU组大鼠接受等量无菌生理盐水作为对照；第6日，ET组大鼠和EIU组大鼠皮下注射300ug LPS诱导眼部炎症，正常组再次接受等量无菌生理盐水处理，给药部位均为右后足。24小时后，于裂隙灯下观察各组大鼠眼前节炎症反应，并进行临床表现及组织病理学评分，通过ELISA法检测房水内TNF-a和IL-6的浓度，RT-PCR和Western Blot定量检测虹膜睫状体内miR-146a、IRAK1和TRAF6mRNA和蛋白的相对表达量以及免疫荧光技术检测虹膜睫状体内NF-κB P65的活化程度。 结果：裂隙灯下可见EIU大鼠虹膜血管显著扩张、前房内纤维素渗出及虹膜后粘连，组织病理学切片证实前房及虹膜睫状体内大量炎性细胞浸润，虹膜睫状体水肿，而ET大鼠临床体征和组织病理学表现均较EIU大鼠减轻，正常大鼠未见明显的葡萄膜炎表现。ELISA法检测房水TNF-a及IL-6水平，正常大鼠房水中TNF-a和IL-6的平均浓度为64.09pg/ml和40.42pg/ml，EIU大鼠房水TNF-a和IL-6的平均含量为428.60pg/ml和107.90pg/ml，ET大鼠房水TNF-a和IL-6的平均含量为289.70pg/ml和65.33pg/ml。RT-PCR结果示，EIU大鼠虹膜睫状体内miR-146a、IRAK1和TRAF6mRNA相对表达量分别为：2.33±0.06，1.68±0.23，1.57±0.28，ET大鼠虹膜睫状体内miR-146a、IRAK1和TRAF6mRNA相对表达量分别为：3.50±0.37，0.90±0.04，0.78±0.03。Western Blot检测EIU大鼠虹膜睫状体内IRAK1和TRAF6的蛋白相对表达量分别为：0.57±0.05和0.56±0.07，ET组IRAK1和TRAF6的蛋白相对表达量分别为：0.47±0.02和0.25±0.06。简言之，与EIU大鼠相比，ET大鼠眼内细胞因子TNF-a和IL-6表达降低，虹膜睫状体内IRAK1和TRAF6mRNA及蛋白相对表达量均降低而miR-146a表达增加，且差异均具有统计学意义（P＜0.05）。同时，免疫荧光结果显示ET大鼠虹膜睫状体内NF-κB P65荧光强度减弱。 结论：LPS预处理可减轻EIU大鼠眼部炎症反应，该过程可能与上调miR-146a表达后抑制IRAK1、TRAF6表达及NF-κB P65活化相关。
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