摘要
研究目的： 子痫前期(PE)是一种较常见的妊娠期高血压疾病，严重影响全球范围内的母婴发病率和死亡率，该病的发病机制尚未明确。PE是一种多系统疾病，各种可能病因相互影响，因此缺乏特异性的检测指标和方法来进行早期诊断或预测疾病的严重程度。基于质谱的蛋白质组学研究能够通过生物标记物的发现，为理解复杂人类疾病的病理生理学提供必要的突破。 本课题采用DIA-PRM技术平台，对子痫前期的血液、尿液标本进行蛋白质组学分析，通过正常妊娠和子痫前期病人样本产前及产后差异蛋白结果对比，来筛选能够鉴别又兼具高特异性和高敏感性的差异蛋白作为生物标记物。 研究方法： 选择符合标准的7例正常妊娠、5例子痫前期孕妇，收集其产前24小时和产后24小时血液、尿液标本，采用数据非依赖采集模式(DIA)蛋白质组学定量方法对产前产后血液、尿液标本进行信息采集并筛选差异蛋白，并对筛选出的差异蛋白进行生物信息学分析。 选择符合标准的20例正常妊娠、25例子痫前期、15例妊娠期高血压孕妇，收集产前24小时和产后24小时尿液标本，采用平行反应监测(PRM)技术对目标差异蛋白进行相对定量并靶向验证。验证有统计学意义的差异蛋白利用接受者操作特征曲线(ROC)、曲线下面积(AUC)进行评估，寻找鉴别效率高的生物标记物及相关组合。 研究结果： 第一部分中，通过DIA技术，以组内产前产后对比，本研究筛选出血清中差异蛋白274个，其中子痫前期组84个，对照组190个;尿液中差异蛋白671个，其中子痫前期组449个，对照组222个，差异蛋白分别有不同程度的上调和下调表达。生物信息学分析结果显示，子痫前期差异蛋白在炎症免疫反应、内皮损伤、细胞增殖和血管发生相关信号通路异常，在肾素血管紧张素信号通路、肾上腺髓质素信号通路、心肌肥厚信号通路明显正向激活。子痫前期及正常妊娠血清、尿液中具有重要功能的差异蛋白变化趋势相对一致，子痫前期组变化趋势不一致的差异蛋白在产后血清中表达下调、尿液中表达上调，包括PRDX2、CD99、ITGB1三个蛋白，其中CD99、ITGB1与正常妊娠组变化趋势一致，而PRDX2与正常妊娠组表达变化不同，其差别有待进一步验证。 第二部分中，通过筛选，本研究最终选择子痫前期(n=20)、正常妊娠(n=18)、妊娠期高血压(n=11)三组尿液标本。通过PRM技术共定量109个蛋白（157个多肽），与DIA趋势～致的有73个蛋白（99肽段），其中产前上调28蛋白（35肽段），产前降低45个蛋白（64肽段）;与DIA趋势一致，且p＜0.05的有16个蛋白（18肽段），其中上调2个蛋白（2肽段），降低14个蛋白（16肽段）。结合散点图及ROC曲线，筛选出11个具有鉴别意义的候选生物标记物，MXRA5、VGF、VATA、NTF2、LTBP2、FLNA、FAT4、CREL1、LIRB4、FIBB、PRDX2可作为区分子痫前期和正常妊娠的候选生物标记物;其中MXRA5、VGF、VATA、NTF2、LTBP2、FLNA可作为区分子痫前期、正常妊娠及妊娠期高血压的候选生物标记物。蛋白VGF的鉴别效率最高，AUC=0.939，三个蛋白VGF、CREL1和LTBP2组合AUC=0.95(95％CI:0.854-1)鉴别子痫前期与正常妊娠效率较高;两个蛋白FLNA和LTBP2组合AUC=0.92(95％CI:0.75-1)鉴别子痫前期与妊娠期高血压效率较高。 研究结论： 1、铁死亡通路差异蛋白明显激活，可能与子痫前期相关损伤有关。 2、11个差异蛋白MXRA5、VGF、VATA、NTF2、LTBP2、FLNA、FAT4、CREL1、LIRB4、FIBB、PRDX2可能作为区分子痫前期和正常妊娠的候选生物标记物;其中三个差异蛋白VGF、CREL1和LTBP2组合(AUC=0.95)鉴别子痫前期与正常妊娠效率更高。 3、6个差异蛋白MXRA5、VGF、VATA、NTF2、LTBP2、FLNA可能作为区分子痫前期、正常妊娠及妊娠期高血压的候选生物标记物;其中两个差异蛋白FLNA和LTBP2组合(AUC=0.92)鉴别子痫前期与妊娠期高血压效率更高。
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