摘要
研究目的： 胃腺癌是最常见的消化道恶性肿瘤，目前其发病率在人体恶性肿瘤中排名第五，死亡率更是高居第三。MicroRNA(miRNA)是一类内源性非编码RNA，长度约为20-24个核苷酸。miRNA在胃腺癌的发生和发展中起着至关重要的作用。据报道，微小RNA-615-5p（microRNA-615-5p，miR-615-5p）在多种癌症中发挥着重要作用，然而，在现有的文献中，胃腺癌中miR-615-5p的作用机制的研究还较少。本文的目的是为了探讨miR-615-5p在胃腺癌中的表达及作用机制。 研究方法： 1．选取48例胃腺癌组织样本及其相应癌旁组织样本，采用qRT-PCR法检测组织中miR-615-5p表达，分析miR-615-5p表达与胃腺癌临床特征的相关性。 2．将人胃腺癌细胞系（BGC细胞、HGC细胞和MGC细胞）和人正常胃粘膜细胞（GES细胞）作为细胞水平的研究对象，qRT-PCR检测胃腺癌细胞系中miR-615-5p及IGF2mRNA的表达情况。 3．通过miR-615-5p在不同胃腺癌细胞中的表达情况，选取HGC细胞为过表达研究对象，分为过表达对照组（转染control mimics）和miR-615-5p过表达组（转染miR-615-5p mimics），选取MGC细胞为敲减研究对象，分为低表达对照组（转染control inhibitor）和miR-615-5p低表达组（转染miR-615-5p inhibitor）。 4.采用平板克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验验证过表达或敲减miR-615-5p对胃腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。 5.通过生物信息学预测miR-615-5p可能结合的靶基因。 6.通过蛋白免疫印迹实验检测转染miR-615-5p mimics及inhibitor后的目的基因IGF2(insulin-like growth factor-2,IGF2)的表达水平以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白的水平。 7.采取平板克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验以及蛋白免疫印迹实验检测共转染miR-615-5p inhibitor及IGF2的小干扰RNA后，胃腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。 8.共转染miR-615-5p inhibitor及IGF2的小干扰RNA后，通过蛋白免疫印迹实验检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白的水平。 研究结果： 1.胃腺癌组织中miR-615-5p表达水平显著低于正常癌旁组织（P＜0.01），胃腺癌组织miR-615-5p表达水平与胃腺癌肿瘤的大小及淋巴结转移有关（Ｐ＜0.01）。 2.胃腺癌细胞系中的miR-615-5p表达水平显著低于正常胃黏膜上皮细胞GES（P＜0.01）。 3.过表达miR-615-5p后可抑制胃腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭；敲减miR-615-5p后可促进胃腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭。 4.通过生物信息学预测到IGF2是miR-615-5p的潜在靶基因，低水平的IGF2可以使得胃癌病人的生存时间增加。在敲减miR-615-5p的基础上，沉默IGF2可逆转敲减miR-615-5p对胃腺癌细胞发展的促进作用。 5.过表达miR-615-5p后，IGF2、PI3K、AKT、mTOR蛋白的表达明显低于miR-615-5p NC组；敲减miR-615-5p后，IGF2、PI3K、AKT、mTOR蛋白的表达明显高于miR-615-5p NC组。共转染miR-615-5p inhibitor及si-IGF2后，IGF2、PI3K、AKT、mTOR蛋白的表达水平均可被逆转。 研究结论： miR-615-5p在胃腺癌组织、细胞中的表达显著下调。过表达miR-615-5p可以抑制胃腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭。此外，miR-615-5p可以通过直接靶向IGF2使PI3K/AKT/mTOR信号通路失活，从而抑制胃腺癌的发生发展。miR-615-5p可能为胃腺癌的诊断、预后及治疗的新靶点。
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