摘要
啶虫脒(acetamiprid)，属氯化烟碱类化合物，是一种重要的新烟碱类杀虫剂，常用于稻田中飞虱等虫害的防治，但由于其良好的水溶性和不易发生水解等特性，对稻田系统中的非靶水生生物构成了潜在的威胁。黑斑蛙（Rana nigromaculata），是我国分布最为广泛的稻蛙，其幼体（黑斑蛙蝌蚪）生长速度快，皮肤具有高度的渗透性，长期生活在污染的稻田中，此外还会经历变态发育阶段（此阶段对外源污染物更加敏感）。本文以黑斑蛙蝌蚪作为研究对象，开展了新烟碱农药啶虫脒对黑斑蛙蝌蚪的急性毒性、生长抑制影响、生理生化参数影响、代谢组学研究和生物富集-消除，主要研究主要结论如下： 1、开展了啶虫脒对黑斑蛙蝌蚪急性毒性试验。结果表明：啶虫脒对蝌蚪的24、48、72和96h的LC50值为分别为51.49、43.57、30.81和18.49mg/L，根据《化学农药环境安全评价实验准则第18部分-天敌两栖类急性毒性试验》毒性等级划分，啶虫脒对黑斑蛙蝌蚪为低毒。 2、基于急性毒性的结果，开展了啶虫脒对黑斑蛙蝌蚪的亚慢性毒性，考察啶虫脒对黑斑蛙蝌蚪生长抑制影响、生化参数的影响和代谢组学研究。结果表明黑斑蛙蝌蚪经28天的0.185和1.85mg/L的啶虫脒水溶液暴露后，与对照组相比，蝌蚪的生长形态参数（体长、尾长、体重和眼间距）和甲状腺相关激素（TSH、TH、T3和T4）含量等未出现显著影响，表明啶虫脒未对蝌蚪的生长产生抑制；经啶虫脒亚慢性暴露后，蝌蚪的生化参数发生了显著的变化，包括CAT、SOD、GR、GST和MDA水平显著上升，同时造成了AchE和蛋白含量显著下降，且这些生化参数的变化与啶虫脒浓度呈正相关；在代谢组学研究中，啶虫脒显著的影响了蝌蚪体内的核苷酸和类似物、有机酸及其衍生物、有机氮化合物、有机氧化合物脂质和类脂质分子等代谢物；高、低浓度处理组中存在显著性差异代谢物，表明高、低浓度的啶虫脒对蝌蚪产生的毒性效果有明显差异。此外，对差异代谢物进行通路富集分析，缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成（Valine,leucine and isoleucine biosynthesis）、甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸的代谢（Glycine,serine and threonine metabolism）、不饱和脂肪酸的生物合成（Biosynthesis of unsaturated fatty acids）、鞘脂代谢（Sphingolipid metabolism）、亚油酸代谢（Linoleic acid metabolism）和组氨酸代谢（Histidine metabolism）等代谢通路；结合蝌蚪生理参数的变化和代谢组学的研究结果，表明在亚慢性暴露期间，蝌蚪体内存在强烈的氧化应激，且与浓度呈正相关。 3、建立了啶虫脒在蝌蚪和水体中的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测方法，结果表明：啶虫脒在蝌蚪和水体检测限（LOD）分别为0.003和0.002mg/kg，定量限（LOQ）分别为0.001和0.0005mg/kg；啶虫脒在溶剂和基质的浓度与峰面积有良好的线性关系（R2gt;0.99）；添加回收实验表明，在蝌蚪基质中的平均回收率在87.00-102.76%，相对标准偏差（RSD）为2.12-4.74%，在水体中的平均回收率为87.13-105.11%，RSD为5.91-7.72%。方法的灵敏度、准确度及稳定性均能满足实验的分析要求。基于检测方法，开展了啶虫脒在黑斑蛙蝌蚪体内的生物富集-降解试验。结果表明：不同浓度的暴露富集对比实验，发现蝌蚪体内啶虫脒的浓度与暴露的浓度存在剂量效应关系；啶虫脒在蝌蚪体内的富集表现为快速吸收，0.185和1.85mg/L暴露溶液中的生物富集系数（BCF）分比为0.56和0.39（lt;1），表明啶虫脒在蝌蚪体内富集的潜力较低。在消除实验中，啶虫脒也表现出快速消除，0.185和1.85mg/L的半衰期分别为0.44和0.65天。
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