摘要
烟草属于双子叶植物纲，管花目，茄科，烟属，是我国重要的经济作物之一。由多主棒孢霉菌引起的烟草棒孢霉叶斑病，是近年来致使烟叶品质和产量下降的因素之一。为了更科学的防治烟草棒孢霉叶斑病，本研究通过对烟草棒孢霉叶斑病进行病原菌分离鉴定与线粒体基因组分析、生物学特性、防治杀菌剂和生防菌的筛选研究，取得的主要结果如下： 1.采用常规组织分离法对贵州省采集的烟叶进行病原菌分离与纯化，根据柯赫氏法则进行致病性测定，得到两个代表菌株YC1002和YC1104，通过形态学特征及ITS序列分析以及系统发育分析将其鉴定为多主棒孢霉Corynespora cassiicola。利用Illumina和Nanopore测序平台对真菌病原菌烟草棒孢霉的线粒体基因组进行测序。结果显示，环状真菌线粒体基因组全长43963bp，由15个蛋白质编码基因、27个tRNA基因和2个rRNA基因组成。系统发育分析显示，烟草棒孢菌与多主棒孢菌密切相关。 2.在贵州烟草棒孢霉叶斑病病原菌生物学特性研究中，得出病原菌在胡萝卜琼脂培养基（CA）上生长最快，生长至第11d时在马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）上产孢量最多。最适生长温度为30℃。病原菌对pH值适应范围较宽，在pH4~11范围内均可生长，菌丝致死温度为52℃10min，光照对菌丝生长影响不大。最适碳源为麦芽糖和可溶性淀粉，最适氮源为甘氨酸和苏氨酸。 3.不同温度、pH、诱孢方式以及碳氮源对烟草棒孢霉叶斑病病原菌产孢量影响的研究表明，病原菌产孢量最多的碳氮源分别为果糖和硝酸钠。在马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）上，病原菌产孢量最多的温度为30℃，pH值为7，诱孢方式为：将健康烟叶剪下，清洗干净，剪成2×2cm长的方块，121℃高压灭菌20min放凉后，置于接种的菌饼表面，12h近紫外光照射／12h黑暗交替培养。在马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）上，病原菌产孢量最多的温度为28℃，pH值为6，诱孢方式为：将健康烟叶剪下，清洗干净，剪成2×2cm长的方块，121℃高压灭菌20min放凉后，置于接种的菌饼表面，12h近紫外光照射／12h黑暗交替培养，和12h近紫外光照射／12h黑暗交替培养。 4.采用菌丝生长速率法测定了病原菌对8种杀菌剂的敏感性，同时进行了生防菌株的筛选。结果显示，室内毒力测试中，咪鲜胺和氟啶胺EC50值最小，分别为0.2092μg/mL和0.2510μg/mL。从供试85株生防菌中筛选出7个菌株对供试病原具有较强的拮抗效果，其中有两个菌株YC2140和YC2148对靶标病原菌的抑制效果最好，抑菌率为67.3%和63.52%；经鉴定，这两个菌株分别为荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens和产吲哚金黄杆菌Chryseobacterium indologenes。盆栽和田间防效试验表明，氟啶胺和咪鲜胺的防效均在70%和40%以上，防效较好。
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