摘要
植物在生长过程中会面临病原物入侵，因此植物进化出多种防御机制应对外界胁迫。拟南芥NPR1（Nonexpressor of pathogenesis-related genes1）被认为是水杨酸（SA）的受体，当受到外界侵袭时产生植物防御激素SA，局部组织会积累并激活SA信号转导，建立广谱抵抗植物胁迫的防御机制——植物系统获得性抗性（SAR）。NPR1能感受胞内氧化还原的变化，NPR1与NIMIN（NIM interacting）相互作用并抑制其免疫应答，NPR1通过激活负调控因子NIMIN抑制SA信号，以维持免疫稳态。因此，对NPR1-NIMIN蛋白结构和相关功能的研究将有助于阐明SA信号转导过程中和NPR蛋白之间的复杂分子机制，为解决植物抗病育种问题提供新的启示。 本文选择拟南芥NPR1为实验对象，利用原核（大肠杆菌）系统成功表达NPR1全长蛋白、截短蛋白以及NPR1与NIMIN复合物蛋白，推测NPR1是四聚体形式存在，但无法获得全长晶体。利用二级结构预测分析和酶切质谱实验，进行NPR1截短构建；成功筛选良好结晶△NPR1（42-432）和△NPR1（42-438）。随后，为了获得NPR1全长蛋白结构，利用NIMIN进行复合物组装，稳定NPR1结构。通过构建不同载体组装复合物，获得纯度高、状态均一的复合物样品。最终，利用冷冻电镜解析其结构，实际得到“2+2”复合物结构。本文为NPR1蛋白三维结构以及作用机制的研究提供了参考。
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