摘要
目的：哈蟆油为雌性林蛙输卵管的干制品。经现代药理学研究表明，哈蟆油具有提高机体免疫功能、抗疲劳等药理作用。本实验以自然衰老小鼠为研究对象，通过观察OR对自然衰老小鼠学习记忆能力、脑组织中氧化应激水平以及抗应激能力的影响，旨在进一步研究其抗衰老作用的机制，为动物药的进一步开发以及研究提供新的思路。 方法：选择五十三周龄小鼠为衰老模型小鼠,每天以哈蟆油100、200、400mg/kg等三个剂型灌胃后给药一次,空白组给与相同容积的蒸馏水20ml/kg,并持续给药十四天。通过Morris水迷宫试验测定小鼠的学习与记忆能力;通过酶联免疫法测定小鼠血清中的炎症因子和免疫因子以及脑组织中氧化应激指标；采用Western Blot检测小鼠脑组织中Nrf2信号通路相关蛋白的表达情况；利用网络药理学对哈蟆油的抗应激作用进行分析，并以低温条件下游泳和常压耐缺氧实验加以验证。 结果： 1.哈蟆油改善自然衰老小鼠学习认知障碍 自然衰老模型组小鼠实验过程中出现摄食减少，毛发暗而发黄，活动迟缓，少动等现象。而哈蟆油各剂量组可使衰老小鼠摄食逐步恢复正常，精神良好，活动能力增强，毛发略有光泽。Morris水迷宫试验结论指出,同模型组相比哈蟆油高、中剂量组的目标象限总路程都明显降低；哈蟆油高剂量组潜伏期显著减少。提示哈蟆油具有改善自然衰老小鼠学习记忆能力的作用。 2.哈蟆油通过Nrf2信号通路改善衰老小鼠脑组织氧化应激水平 哈蟆油中、高剂量,可明显增加老化的小鼠血液中SOD与GSH-Px水平,MDA及Lipo的含量均明显降低;同时,哈蟆油的各剂量组均能提高老龄小鼠脑组织中Nrf2、HO-1和NQO1的蛋白质表达。提示了哈蟆油能通过活化Nrf2信息通路起到明显降低自然衰老小鼠细胞氧化应激水平的效果。 此外，哈蟆油还可增加衰老小鼠血清中IgA、IgG、IL-1以及IL-2含量，提示哈蟆油对自然衰老小鼠免疫功能具有一定的调节作用。 3.哈蟆油增强小鼠抗应激能力 通过网络药理学对哈蟆油中组分加以解析,并使用STP数据库,可以得出哈蟆油与抗应激作用的相对靶点;通过Clue GO插件和Metascape数据库,对关键的靶基因实现了GO解析和KEGG解析;并使用Cytoscape软件,建立了哈蟆油"成分-靶点-通道"的网络，发现其在抗应激方面具有潜在的作用。 通过相关实验进行验证，发现哈蟆油高剂量组可明显延长成年小鼠和衰老小鼠低温条件下游泳时间；哈蟆油高剂量组还可能显著增加成年小鼠以衰老小鼠缺氧条件下的存活时间，提示哈蟆油可增强小鼠的抗应激能力。 结论： 哈蟆油还能通过激活Nrf2信号通路,降低自然衰老小鼠的氧化反应，有效改善自然衰老小鼠的记忆认知障碍症状，并增强小鼠抗应激能力，从而发挥抗衰老作用。
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