摘要
犬细小病毒(Canineparvovirus，CPV)是一种能感染犬科以及部分食肉动物的高度接触性传染病，目前在世界大部分国家均有传播。该病主要表现型可分为出血性肠炎型和心肌炎型两种，发病率和致死率极高，对犬类的健康造成极大威胁，严重危害了我国犬科动物繁殖以及毛皮动物养殖业的正常发展。本研究采集延边朝鲜族自治州珲春地区一例疑似感染CPV犬粪便拭子，将粪便拭子预处理后接种至MDCK细胞进行病毒分离试验，并对分离所得病毒进行形态学、分子生物学鉴定。扩增CPV-VP2基因，经测序该病毒VP2基因全长约1755bp，编码584氨基酸（已上传GenBank:OM057673）。 YBHC株CPV的病毒分离鉴定。将预处理的粪便拭子样品液接种至MDCK细胞上，48h后收毒，反复冻融3次后，接种在生长状态良好的MDCK细胞上，盲传至第5代后，倒置显微镜下观察MDCK细胞出现拉网、细胞变圆、脱落等明显的细胞病变(CPE);病毒液经过磷钨酸负染后，电镜下可见典型犬细小病毒粒子，无囊膜包被，呈圆形或六边形，约20-24nm;经过间接免疫荧光(IFA)鉴定，可见特异性荧光;测定该病毒滴度TCID50为10-5.14/0.1mL;可证明本次试验成功在延边珲春地区分离到一株犬细小病毒，命名为YBHC株犬细小病毒。 YBHC株CPV的遗传进化分析。选取GenBank数据库中收录的国内外39株CPV-VP2不同亚型毒株与YBHC株CPV进行比对。结果显示，该毒株与其他39株CPV-VP2毒株的核苷酸序列同源性在98.8-99.9％，氨基酸序列同源性在98.5-100％，在系统进化树中与部分地区CPV-2c亚型参考株在同一分支;且与标准株CPV-2c氨基酸变异位点（Phe267Tyr、Gln370Arg、Asp426Glu）相符。 本研究成功分离一株犬细小病毒（YBHC株），通过VP2遗传进化分析鉴定为CPV-2c亚型犬细小病毒，可为延边珲春地区CPV的流行病学调查提供实验依据，对有效防控CPV的流行提供地方种毒和理论依据。
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