摘要
目的:探讨PDIA6(ProteindisulfideisomerasefamilyAmember6，PDIA6)基因对口腔鳞状细胞癌(Oralsquamouscellcarcinoma，OSCC)细胞增殖及迁移的影响及其可能存在的分子机制，为靶向治疗OSCC提供理论依据。 方法:使用脂质体转染方法，在人舌部鳞状细胞癌细胞CAL27和TCA8113中沉默PDIA6基因后，分别用qRT-PCR法和WesternBlot法检测PDIA6的沉默程度;PDIA6基因沉默后，通过MTT法检测细胞增殖的变化、细胞划痕实验测量细胞的横向迁移变化;再用qRT-PCR法检测PDIA6基因沉默后丝裂原激活的蛋白激酶(Mitogenactivatedproteinkinases，MAPK)及c-jun氨基末端应激活化蛋白激酶(c-JunN-terminalstress-activatedproteinkinase，JNK)的mRNA表达水平变化，WesternBlot法检测MAPK、JNK以及pho-JNK蛋白的表达水平变化。 结果: 1.(1)qRT-PCR实验结果:将PDIA6-siRNA转染CAL27和TCA8113细胞24小时后，与阴性对照组相比较，PDIA6的mRNA的相对表达量呈明显下调，差异具有统计学意义（P＜0.01）。(2)蛋白免疫印迹实验结果示:与阴性对照组相比，两种细胞转染PDIA6-siRNA24小时后，PDIA6蛋白的相对表达水平明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.01）。 2.MTT法实验结果:CAL27和TCA8113细胞中转染PDIA6-siRNA24小时后，继续培养48小时、72小时，与阴性对照组组比较，两种细胞在24小时、48小时以及72小时时，细胞的增殖率均明显降低;随着时间延长，细胞增殖的抑制效果更明显，以上差异均具有统计学意义(P＜0.05)。 3.细胞划痕实验结果:将稳定转染PDIA6-siRNA24小时的CAL27和TCA8113细胞继续培养24及48小时，转染组划痕内细胞的横向迁移距离明显低于阴性对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。 4.qRT-PCR实验结果显示:CAL27和TCA8113两种细胞在稳定转染PDIA6-siRNA24小时后，与阴性对照组相比，细胞的MAPK、JNK的mRNA相对表达水平明显下调。蛋白免疫印迹实验结果:与阴性对照组相比，转染PDIA6-siRNA24小时后的两种细胞MAPK和JNK蛋白相对表达水平明显下调，磷酸化JNK蛋白相对表达水平也呈现明显下调，上述所有差异均具有统计学意义（P＜0.05），证明MAPK/JNK传导受到抑制。 结论:在OSCC中，沉默PDIA6可能通过MAPK/JNK抑制癌细胞的增殖与迁移，为靶向治疗OSCC提供一定理论依据。
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