摘要
目的：网络药理学探究女贞子治疗卵巢早衰的作用机制，同时研究女贞子炮制前后有效成分含量变化，女贞子及其炮制品对雷公藤多苷片所致的卵巢早衰大鼠卵巢功能的影响。探讨女贞子哪种炮制品治疗卵巢早衰更具优势，为女贞子进一步研究与临床使用提供依据。 方法： 1.网络药理学：检索TCMSP数据库获得女贞子的活性成分与作用靶点，搜索GeneCards、OMIM和CTD数据库得卵巢早衰相关靶点，利用在线作图工具Venny2.1得到药物与疾病交集靶点。使用Cytoscape3.7.1软件建立活性成分-靶点网络，并对交集靶点绘制PPI网络。利用Metascape数据库对交集靶点进行GO和KEGG富集分析。 2.女贞子炮制前后有效成分含量变化：参照药典及地方中药饮片炮制规范将女贞子炮制成净制、清蒸、醋制、酒制、盐制5种女贞子炮制品；采用HPLC测定女贞子各炮制品中红景天苷、特女贞苷、齐墩果酸的含量变化。 3.动物实验：90只大鼠连续10天进行阴道涂片，筛选动情周期正常大鼠进行实验。将具有正常动情周期的86只SD成年雌性大鼠随机抽取10只作为空白组，其余灌胃雷公藤多苷药液50mg/kg/d，连续14d，建立卵巢早衰模型；造模成功大鼠随机分成模型组、阳性对照组、净制女贞子组、清蒸女贞子组、醋制女贞子组、酒制女贞子组、盐制女贞子组，每组10只。从第15d起，空白和模型组每天灌胃蒸馏水；阳性对照组灌胃戊酸雌二醇；女贞子各组灌胃相应药液，连续21d。测定大鼠卵巢指数、子宫指数，HE染色法检测大鼠卵巢、子宫组织变化，ELISA法测定大鼠血清E2、P、FSH和LH浓度，WesternBlot法检测大鼠卵巢和子宫Bcl-2和Bax蛋白表达水平。 结果： 1.筛选后得到女贞子中活性成分16个和药物靶点181个，卵巢早衰靶点4676个，药物-疾病的交集靶点160个。关键成分有槲皮素、木犀草素、红景天苷、齐墩果酸等，关键靶点涉及AKT1、TP53、VEGFA等。GO富集分析主要涉及对无机物、激素、外来刺激的反应等。KEGG富集分析包括癌症通路、脂质与动脉粥样硬化、化学致癌-受体激活等。本研究表明女贞子可以多成分、多靶点、多通路影响卵巢早衰的发生。 2.含量测定结果显示炮制方法对女贞子中红景天苷、特女贞苷和齐墩果酸的含量有一定影响。各炮制品中特女贞苷含量在蒸制后较净制女贞子降低；醋制女贞子组中红景天苷和齐墩果酸含量高于其他炮制品组。 3.与模型组相比，除净制女贞子外，其余给药组卵巢指数均升高（P＜0.05）；阳性对照组与净制女贞子组子宫指数升高（P＜0.05）；各给药组大鼠卵巢中各级卵泡增加，闭锁卵泡减少，黄体发育良好，子宫内膜增厚，腺体增加；阳性对照组E2、P水平提高，FSH、LH水平下降（P＜0.01），醋制、酒制与盐制女贞子组E2水平升高（P＜0.05），除盐制女贞子组，其余女贞子炮制品组P水平皆上升（P＜0.05），女贞子各组FSH、LH水平均显著降低（P＜0.01）；除清蒸女贞子组，各给药组卵巢Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax比值均显著升高（P＜0.01），所有给药组卵巢Bax蛋白表达明显下降（P＜0.01）；各给药组子宫Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax比值均显著升高（P＜0.01），Bax蛋白表达明显下降（P＜0.01）。 结论：女贞子对治疗卵巢早衰有一定的作用，可在一定程度上改善雷公藤多苷致POF模型的卵巢功能。在各炮制品中，醋制女贞子效果最佳。
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