摘要
卵母细胞体外成熟技术的应用和发展对于种畜扩繁和改良至关重要。相比较体内成熟而言，体外成熟容易受到外界环境因素的影响，并容易发生核质成熟的不同步化，因而造成卵母细胞质量差、成熟效率低。近些年来，人们不断优化和改良体外成熟液来促进卵母细胞成熟。KitLigand作为一种多效生长因子，在卵泡中由颗粒细胞分泌，通过旁分泌途径调控卵母细胞成熟。然而，在绵羊卵母细胞体外成熟培养中，KitLigand对于卵母细胞核成熟、胞质成熟以及早期胚胎发育的影响尚缺乏系统研究。本研究通过在体外成熟液中添加*、*、*、*ng/mLKitLigand培养卵母细胞，探究KitLigand对体外卵母细胞核、质成熟及早期胚胎发育的影响，以期建立更加有效的绵羊卵母细胞体外培养体系。实验结果发现： （1）在卵母细胞成熟液中添加不同浓度的KitLigand，*ng/mL能够显著提高卵母细胞第一极体排放率。但是并不会影响生发泡破裂(Germinalvesiclebreakdown,GVBD）率，表明KitLigand并非通过促进减数分裂重新启动来促进核成熟。 （2）卵丘扩展对于卵母细胞体外成熟、体外受精及早期胚胎发育具有重要意义。成熟培养液中添加*ng/mLKitLigand能够显著促进卵丘扩展。 （3）皮质颗粒的分布随卵母细胞成熟的进程而发生迁移，在成熟的卵母细胞中皮质颗粒迁移到质膜下呈单层线状分布。成熟培养液中添加*ng/mLKitLigand能够提高卵母细胞皮质颗粒单层线状分布的比例。 （4）活性氧(Reactiveoxygenspecies,ROS)在卵母细胞过度积累会抑制卵母细胞发育，诱导早期凋亡。成熟培养液中添加*ng/mLKitLigand会显著降低卵母细胞内的ROS水平。 （5）线粒体是卵母细胞成熟过程中重要的产能细胞器，成熟培养液中添加*ng/mLKitLigand显著提升线粒体膜电位并改善线粒体分布。 （6）通过RT-qPCR实验对卵丘扩展相关基因HAS2、PTGS2、TNFαIF6、PTX3及凋亡相关调控基因BAX、BCL-2进行检测，成熟培养液中添加*ng/mLKitLigand能够显著提升HAS2、PTGS2、TNFαIF6、PTX3mRNA的表达水平；并显著降低BAX/BCL-2的表达量。 （7）与不添加KitLigand的对照组相比，成熟培养液中添加*ng/mLKitLigand可以显著提升卵母细胞受精后的囊胚发育率。 综上所述，KitLigand作为卵母细胞的旁分泌因子，在卵母细胞体外培养过程中，对核质成熟发挥重要作用，通过促进核、质成熟提高早期胚胎发育效率。该结果为未来家畜卵母细胞体外成熟培养体系的优化提供了重要理论依据。
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