摘要
乳腺癌目前在我国癌症中它的发病率较高，乳腺癌患者的生存率较低，原因是肿瘤细胞的随机转移。因此找到能治疗并且拥有较低副作用的药物具有重要的研究意义。肿瘤的转移与乏氧的微环境相关，转移的主要原因在于HIF-1α的表达调控。小檗碱是一种天然存在的生物碱，大量的研究结果表明它具有抗癌作用，并且对乳腺癌有抑制其增殖的作用。因此，本研究拟探讨在正常氧和缺氧两种环境下，小檗碱对乳腺癌细胞生长和转移不同的影响及其作用机制。 本研究主要内容如下： 1.MTT实验结果表明，乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7和4T1-Luc经小檗碱处理48h，在正常氧环境下，其IC50值分别是5.33±0.59μM、10.26±2.17μM和26.89±3.58μM；在缺氧环境下，其IC50值分别是4.14±0.35μM、26.53±3.12μM和11.62±1.44μM。实验表明小檗碱可以抑制乳腺癌细胞的生长增殖，小檗碱对MDA-MB-231和4T1-Luc细胞在缺氧环境下的抑制效果较好。 2.RT-qPCR实验探究了在正常氧和缺氧环境下，小檗碱处理MDA-MB-231、MCF-7和4T1-Luc细胞48h后，对缺氧和转移相关基因HIF-1α、E-cadherin和β-catenin的影响。结果发现小檗碱处理后，除了缺氧处理的4T1-Luc和MDA-MB-231细胞外，其他情况都是促进HIF-1α基因的表达；除MCF-7细胞外，其他情况都是促进E-cadherin基因的表达；β-catenin基因表达在三种乳腺癌细胞中都随着小檗碱浓度的增大而升高。 3.划痕和侵袭实验结果显示，小檗碱在正常氧和缺氧环境下会浓度依赖性抑制MDA-MB-231、MCF-7和4T1-Luc细胞的迁移与侵袭。缺氧微环境会升高低浓度小檗碱抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞迁移的能力，它也会升高高浓度小檗碱抑制4T1-Luc细胞侵袭的能力。 4.细胞免疫荧光实验观察了HIF-1α、E-cadherin和N-cadherin蛋白在三种乳腺癌细胞上的定位，结果显示HIF-1α蛋白定位在细胞核上，E-cadherin和N-cadherin两种蛋白为跨膜蛋白，且HIF-1α蛋白和E-cadherin有重叠的部分；HIF-1α蛋白有随着小檗碱浓度增大而减少的表达趋势，E-cadherin蛋白和N-cadherin蛋白的表达随着小檗碱浓度的增大，前者呈现增加的趋势，后者呈现减少的趋势。蛋白免疫印迹实验证明，小檗碱处理后，HIF-1α蛋白表达在三种乳腺癌细胞中呈浓度依赖性减少；除MCF-7细胞外，E-cadherin蛋白和β-catenin蛋白都呈浓度依赖性升高。 5.小鼠原位移植瘤模型表明，小鼠体内乳腺癌的生长和转移被小檗碱明显抑制，且与阳性药物组相比，高浓度小檗碱处理组对体内乳腺癌肿瘤生长和转移的抑制效果更好。 综合以上结果得出结论，小檗碱能抑制乳腺癌细胞的生长和转移。在正常氧和缺氧环境下，小檗碱是通过影响HIF-1α蛋白，影响了E-cadherin和β-catenin蛋白的表达，从而影响了上皮间质转化（EMT）途径间接影响了细胞的转移。总体得出，小檗碱通过调控肿瘤乏氧微环境抑制乳腺癌生长和转移。小檗碱的副作用低，可以有效延长小鼠生存期。研究为把小檗碱开发成临床治疗乳腺癌的新药提供理论基础。
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