摘要
大量研究表明，黄酮类化合物具有良好的抗氧化活性。沙棘在我国大量种植，分布面积广，沙棘属植物黄酮含量高，并具有多种功效。然而，不同种属和产地沙棘黄酮的含量、单体组成和抗氧化活性均有不同，相关研究仍较少。本文系统研究了不同沙棘果中黄酮类化合物的含量及其抗氧化活性，以期为提高沙棘综合开发利用提供参考。 本研究首先以不同产地、不同品种的七种沙棘果作为原料，采用超声辅助乙醇提取法提取沙棘鲜果中的黄酮类化合物，并比较果中总黄酮含量大小，干基含量由12.69mg/g至22.35mg/g不等，其中含量最多的为产自黑龙江省哈尔滨市的深秋红。之后对提取得到的黄酮样品进行抗氧化活性分析，通过计算EC50值比较出对·OH及·O2-自由基的清除能力大小，最终筛选出黑龙江省内黄酮含量最高且抗氧化活性最强的哈尔滨深秋红沙棘果作为后续实验原料。 通过单因素与响应面试验对产自哈尔滨的深秋红沙棘果黄酮的超声提取进行优化，结果表明影响此沙棘黄酮提取得率的主次因素的顺序为乙醇浓度＞液固比＞提取时间，最佳工艺条件为乙醇浓度95%、液固比37.17mL/g、超声时间92.15min，预测的得率为1.55%，实际操作时在乙醇浓度95%、液固比35mL/g、超声时间90min条件下进行重复试验验证，得到哈尔滨深秋红沙棘果的总黄酮得率为（1.46±0.03）%（n=3）。 通过聚酰胺柱层析对沙棘黄酮进行纯化，优化条件得到适宜的上样浓度为1mg/mL，上样量为5BV，乙醇浓度为90%，用量为8BV。收集60%及90%乙醇洗脱组分，通过液质进行组分分析，结果表明60%组分的主要黄酮成分为儿茶素、没食子儿茶素、羟硫黄素及6-异戊烯柚皮素，90%组分中主要黄酮成分为芦丁、槲皮素3，3-二甲醚、羟硫黄素及儿茶素，后通过自由基清除实验比较得出90%乙醇组分的抗氧化活性高于60%乙醇组分。 通过建立H2O2氧化损伤L929细胞模型，研究90%组分的沙棘黄酮对氧化损伤的防护和修复作用。结果表明其具有显著的防护作用及修复作用。实验表明，用H2O2处理L929细胞细胞会造成其早期和晚期凋亡，而先用黄酮预处理会抑制这种凋亡发生。沙棘黄酮对L929细胞抗氧化酶系的影响结果表明，在H2O2损伤L929细胞前用黄酮进行孵育，可显著提高L929细胞SOD、CAT活力，降低MDA的含量，说明沙棘黄酮能够通过干预L929细胞，提高SOD、CAT等抗氧化酶的活性，抑制脂质过氧化程度，降低MDA含量，从而减轻H2O2对L929细胞的氧化损伤。
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