摘要
目的： 本研究旨在证实转化生长因子-β1（TGF-β1）可通过上调FoxO1，进而发挥促进动脉粥样硬化斑块内M2巨噬细胞极化，从而减轻动脉粥样硬化的发生、进展。探讨TGF-β1通过FoxO1信号通路在动脉粥样硬化斑块内发挥抗炎作用的分子机制。 方法： 本实验以8周龄载脂蛋白E基因缺陷（ApoE-/-）小鼠为实验对象通过高脂饮食喂养建立动脉粥样硬化疾病模型。以C57BL/6J小鼠作为对照组，维持饲料喂养12周。疾病组小鼠分为高脂饮食组、高脂饮食+TGF-β1组、高脂饮食+TGF-β1+ICG-001组、高脂饮食+ICG-001组、高脂饮食+抗CD86抗体组、高脂饮食+TGF-β1+抗CD86抗体组。疾病组各组小鼠高脂饮食喂养12周，高脂喂养第10周开始分别给各项干预，至12周末结束。12周后留取各组小鼠的血清、主动脉等。生化法检测各组小鼠血脂水平。各组主动脉组织分别进行大体油红O染色，主动脉瓣的HE染色、Masson染色、油红O染色，观察各组动脉粥样硬化斑块进展的情况。免疫荧光化学法检测各组巨噬细胞、M2巨噬细胞等的表达情况。蛋白免疫印迹法检测动脉硬化斑块中巨噬细胞、M2巨噬细胞等标志物蛋白及FoxO1通路相关蛋白的表达水平。使用SPSS26.0统计软件分析、GraphpadPrism9.2绘图。计量资料采用均数±标准差（Mean±SD）表示；统计分析依组别采用t-检验、单因素方差分析（OnewayANOVA），P＜0.05被认为差异具有统计学意义。 结果： 1.建立小鼠动脉粥样硬化（AS）模型，小鼠外周血TG、CHO、LDL水平升高，大体油红O染色，以及主动脉根部油红O染色、HE染色、Masson染色示动脉粥样硬化斑块形成，动脉壁大量脂质沉积，免疫荧光化学法检测到AS中F4/80平均荧光强度高出Control组，蛋白质印迹实验示AS模型小鼠动脉组织CD68表达增多（P＜0.01）； 2.TGF-β1、TGF-β1联合ICG-001干预，各组间血脂指标有所下调，油红O染色，以及主动脉根部油红O染色、HE染色、Masson染色示脉粥样斑块面积较HF组减少，脂质沉积减少，TGF-β1联合ICG-001干预后斑块面积较TGF-β1组减少；免疫荧光化学法示：HF+TI组F4/80阳性染色面积及荧光强度低于HF组（P＜0.001），HF+TI组CD206阳性染色面积及荧光强度较HF+T组高，但没有统计学意义（P＞0.05）。HF+TI组CD68的蛋白相对表达量低于HF+T组（P＜0.001），CD206的蛋白相对表达量高于HF+T组（P＜0.01）。与HF组相比，TGF-β1干预后可增加FoxO1蛋白表达，TGF-β1与ICG-001联合干预后FoxO1蛋白表达量进一步增多（P＜0.001）。TGF-β1与ICG-001联合干预降低了P-FoxO1的表达（P＜0.01）； 3.抗CD86单克隆抗体干预后TG、CHO、LDL均有下降（P=0.0141,P＜0.05；P=0.0007,P＜0.001；P=0.0253,P＜0.05），大体油红O染色阳性染色区域及主动脉瓣区斑块面积较HF组减少。免疫荧光染色示：抗CD86单克隆抗体干预后F4/80阳性染色面积及平均荧光强度低于HF组（P＜0.0001）。 结论： 1.TGF-β1减轻小鼠AS模型中动脉粥样硬化斑块，TGF-β1联合ICG-001干预抗动脉粥样硬化效果不亚于单独TGF-β1干预； 2.TGF-β1联合ICG-001激活并上调FoxO1通路，促进AS模型小鼠斑块内M2巨噬细胞极化，同时减少斑块局部巨噬细胞浸润，减轻动脉粥样硬化； 3.抗CD86单克隆抗体减轻AS模型小鼠斑块内巨噬细胞浸润，减轻动脉粥样硬化。
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