摘要
研究背景： 肺癌一直是世界上发病率及死亡率最高的癌症之一，其中，非小细胞肺癌约占发病率的80%，大约50-70%的患者确诊时已处于中晚期，5年生存率极低，故人们对其研究不断深入。肿瘤微环境（tumormicroenvironment,TME）是肿瘤细胞所处的内环境，被称为“肿瘤间质”，其中广泛存在的肿瘤关巨噬细胞（Tumorassociatedmacrophages,TAMs）能分泌多种细胞因子，激活特定的细胞通路，在肿瘤的发生发展中扮演着不可或缺的角色。 研究目的： 验证非小细胞肺癌组织中用CD206、CD163标记TAMs的可靠性，并观察TAMs在非小细胞肺癌组织中的表达情况及其临床病理特点，探究其中的关系。探究TAMs细胞对STAT3信号通路及非小细胞肺癌细胞系A549、PC-9凋亡的影响。 研究方法： 1.用免疫组化法处理60例非小细胞肺癌患者的癌灶及其周边正常肺组织标本，观察TAMs表面标记物CD206、CD163与STAT3、p-STAT3的表达情况，并探究它们之间的相关性。 2.用PMA联合IL-4的方法将THP-1诱导成TAMs，并用PCR检测诱导后细胞CD206、CD163的表达情况，以判断是否成功诱导成TAMs。 3.取诱导成功的TAMs细胞上清液作为条件培基（CM），用其与JAK2/STAT3通路抑制剂AG490联合培养非小细胞肺癌细胞系A549及PC-9，观察CM对非小细胞肺癌细胞A549、PC-9凋亡的影响。 4.采用WesternBlot法，检测两种细胞中通路蛋白JAK2、STAT3、p-STAT3的表达水平以判断是否激活相应通路，检测抗凋亡蛋白BCL-2及凋亡蛋白Bax的表达水平，最后分析凋亡及通路之间的联系并探讨其机制。 研究结果： 1.TAMs在非小细胞肺癌（鳞癌、腺癌）间质中的浸润数量明显高于正常组织间质，STAT3及p-STAT3蛋白在非小细胞肺癌癌灶组织中的表达均较癌旁正常组织显著增高。上述TAMs、STAT3及p-STAT3表达情况均与非小细胞肺癌的患者的性别、年龄、浸润深度、淋巴结转移、组织学分级、TNM临床分级不存在明显相关性。非小细胞肺癌间质中CD206(+)、CD163(+)阳性细胞与p-STAT3表达明显正相关，一致率为86.6%。 2.THP-1能在PMA及IL-4联合培养下被成功诱导为TAMs。 3.TAMs细胞上清能增加非小细胞肺癌细胞的恶性程度。 4.TAMs细胞上清能激活非小细胞肺癌细胞中的JAK2/STAT3通路，使抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著降低，而凋亡相关蛋白Bax的表达显著升高。 研究结论： 非小细胞肺癌间质中的肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）对STAT3信号通路有激活作用。佛波酯PMA联合IL-4可诱导人单核细胞THP-1分化为TAMs，且与IL-4浓度正相关。TAMs分泌的细胞因子可激活非小细胞肺癌细胞中的JAK2/STAT3信号通路，从而抑制非小细胞肺癌细胞的凋亡。
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