摘要
异育银鲫(Carassius auratus gibelio)是我国的主要淡水养殖鱼类之一，病害是阻碍银鲫养殖业可持续发展的第一要素。前期研究已证实聚-β-羟基丁酸酯(poly-β-hydroxybutyrate，PHB)作为一种新型益生元，具有提高异育银鲫免疫力和增强抗病力功效，但其具体作用机制尚不明确。本论文采用高通量测序对比分析日粮添加PHB(4%，30d)后异育银鲫脾脏mRNA和miRNA的相对表达，并在细胞水平解析羟基丁酸(β-HB)对异育银鲫脾脏白细胞抗氧化酶活性和JAK/STAT及Th1/Th2细胞分化通路中关键基因表达的影响。结果表明： (1)与对照组相比，饲投PHB组共筛选出7005个显著差异表达的mRNAs和41个差异表达miRNAs。其中，3095个mRNAs表达显著上调，3910个mRNAs表达显著下调；显著差异表达的miRNAs共有41个，包括22个known miRNAs和19个novel miRNAs。其中，22个known miRNAs中10个miRNAs显著上调，12个miRNAs显著下调；同时在19个novel miRNAs中有8个显著上调，11个显著下调。 (2)差异表达的22个known miRNAs主要靶向241个免疫相关基因，包括STAT1、JAK1、NF-κB1等，且这些miRNAs参与如B细胞受体信号通路、Th1/Th2细胞分化、JAK/STAT信号通路等20个免疫相关通路。GO富集和KEGG通路分析结果显示，这些靶基因主要富集于B细胞受体信号通路、Th17细胞分化、Th1和Th2细胞分化、JAK/STAT信号通路、趋化因子信号通路等。 (3)miRNA-mRNA联合分析多数差异表达miRNAs对靶基因mRNAs的表达呈负调控，且每个差异表达miRNA的靶基因数量从1个到多个不等。差异表达miRNAs及其靶基因RT-qPCR验证表达结果与高通量测序获得的结果一致。 (4)基于PHB不溶于水、以及在动物肠道内自然降解为羟基丁酸(β-HB)的特性，本部分以脾脏原代培养白细胞为模型探讨β-HB的免疫增强机制。结果表明，β-HB能够降低细胞内NO浓度和细胞毒性，提高白细胞抗氧化酶活性和降低MDA含量，减少白细胞的氧化损伤，对细胞具有较好的氧化损伤保护作用；进一步，通过酶活测定和RT-qPCR分析代表性差异表达miR-1971-x在PHB调控白细胞抗氧化活性中的功能；结果显示，miR-1971-x参与PHB对免疫细胞抗氧化性能的调控作用，且miR-1971-x负调控JAK/STAT和Th1/Th2细胞分化通路中关键基因的表达。
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