摘要
目的： 伏隔核相关蛋白1（nucleus accumbens-associated1，NAC1）是属于BTB/P0Z蛋白家族的转录辅助调节因子，由NACC1基因编码，在其N端含有BTB结构域，通过介导NAC1与其他分子结合形成NAC1转录复合体，参与多种生物功能的调控，在多种类型癌症的进展中起着推动作用。但NAC1对宫颈癌细胞生物学行为影响方面的研究很少，本研究通过NACC1基因沉默来研究其对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响，为宫颈癌的综合治疗提供新视野、新策略。 方法： 1.采用免疫组织化学法检测正常宫颈组织及宫颈癌组织中NAC1的蛋白表达情况。 2.构建4条针对人NACC1基因的短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）及阴性对照（NC），转染宫颈癌HeLa细胞，观察基因沉默作用，设计RT-qPCR及Western Blot实验筛选出敲低效率最高的质粒用于后续实验。 3.设计CCK8和克隆形成实验检测敲低NAC1后对宫颈癌HeLa细胞增殖能力的影响。 4.设计Transwell侵袭实验和划痕实验检测敲低NAC1后对宫颈癌HeLa细胞侵袭和迁移能力的影响。 5.设计Western Blot实验检测敲低NAC1后对宫颈癌HeLa细胞相关抑癌蛋白p53和p21的影响及上皮细胞-间充质转化（EMT）相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail）的变化，初步探究NAC1是否通过调控p53、p21及EMT机制来促进宫颈癌细胞增殖、侵袭及转移。 结果： 1.免疫组织化学法显示NAC1在部分宫颈癌组织中呈阳性表达，在正常宫颈组织中则未能检出。 2.RT-qPCR和Western Blot实验均显示NACC1-sh4敲低效率最高，用于后续细胞转染实验。 3.敲低NAC1后，宫颈癌HeLa的增殖能力和克隆形成能力均显著下调。 4.敲低NAC1后，宫颈癌HeLa的侵袭和迁移能力减弱。 5.敲低NAC1后，宫颈癌HeLa的p53、p21表达水平增高，EMT相关蛋白E-cadherin表达水平增高，N-cadherin、Vimentin、Snail表达降低。 结论： 1.NAC1敲低能抑制宫颈癌HeLa细胞体外增殖、侵袭和迁移能力。 2.NAC1敲低后，宫颈癌HeLa细胞的p53、p21蛋白表达升高，EMT相关分子指标发生改变，提示NAC1可能通过调控p53、p21及EMT参与宫颈癌发生发展进程。
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