摘要
随着人口老龄化进程，慢性创面的发病率逐年攀升，各种创面治疗的需求日渐增高。脂肪干细胞在加速或促进创面伤口愈合过程中的潜在用途受到关注。外泌体是一种直径为30-150nm的脂质双层小泡，来源于生物体液或由细胞分泌而来，是干细胞发挥功效的重要途径。脂肪干细胞可通过其分泌的外泌体在细胞的增殖、分化、迁移以及改善细胞与微环境的联系中发挥重要作用。MicroRNA（miRNA）转录后抑制编码靶蛋白的特定基因的表达，并随后调节各种生物学过程，miR-146a在伤口愈合中可能发挥作用。 目的: 本研究拟探究MicroRNA-146a修饰的脂肪源性干细胞外泌体对成纤维细胞增殖和迁移的影响及对大鼠背部创面愈合的影响。 方法: 培养脂肪源性干细胞（hASCs）并通过流式细胞仪进行鉴定。构建miRNA-146a minic载体，并将miRNA-146a转染到hASCs细胞中，利用RT-qPCR验证miRNA-146a转染至hASCs细胞中的效率。转染miRNA-146a后，从脂肪干细胞提取外泌体，对外泌体进行鉴定及定量分析。将外泌体处理3T3成纤维细胞，对该细胞增殖情况进行分析，细胞划线检测成纤维细胞迁移能力，Western blot检测成纤维细胞SERPINH1、p-ERK2的表达情况，探究外泌体对成纤维细胞的影响。在SD大鼠颈背部建立伤口模型，注射外泌体干预伤口模型，观察大鼠皮肤缺损的直径及面积，检测伤口组织中CD31的表达，免疫印迹法检测大鼠伤口组织中SERPINH1、p-ERK2的表达，探究外泌体对大鼠伤口愈合的影响。 结果: 人脂肪源性干细胞转染miR-146a后，过表达组细胞的miR-146a表达量较空载组显著增加。通过超速离心法成功提取外泌体，符合外泌体的特征。 miR-146a空载组外泌体和miR-146a过表达组外泌体显著促进成纤维细胞增殖，有促进成纤维细胞迁移的趋势。miR-146a过表达组外泌体组与对照组相比，成纤维细胞SERPINH1、p-ERK2的表达量显著增加。 在外泌体干预大鼠皮肤缺损实验中，miR-146a过表达外泌体组及空载外泌体组大鼠伤口组织CD31的表达量比正常对照组和创面模型组显著增加，脂肪干细胞外泌体可促进大鼠颈背部创面血管生成。Western blot法检测大鼠伤口组织中SERPINH1、p-ERK2表达情况，miR-146a空载外泌体组中SERPINH1、p-ERK2的表达量与创面模型组无显著性差异，miR-146a过表达外泌体组SERPINH1、p-ERK2的表达量比创面模型组显著增加。miR-146a修饰的脂肪干细胞外泌体对大鼠伤口中的成纤维细胞有促进增殖的作用，对大鼠伤口有促进愈合作用。 结论: MicroRNA-146a修饰脂肪干细胞外泌体能够促进成纤维细胞SERPINH1、p-ERK的表达，促进大鼠皮肤伤口组织CD31、SERPINH1、p-ERK2表达，促进大鼠皮肤伤口形成新生血管及成纤维细胞增殖，可促进大鼠皮肤伤口愈合。
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