摘要
卡拉胶寡糖是指由2～10个单糖组成卡拉胶低聚糖，具有较高的活性。硒化卡拉胶属有机硒多糖，但由于卡拉胶分子量大、水溶性差等，导致其生物吸收利用率低。难以发挥其功能。本文利用氧化降解降解卡拉胶，制备出分子量较低的硒化卡拉胶寡糖，并对其毒理性及活性进行研究，主要研究内容包括: 1、探究过氧化氢降解卡拉胶的水解规律，考察反应过程中的温度、时间、双氧水浓度及糖浓度对卡拉胶水解度的影响。得出卡拉胶最佳水解条件，过氧化氢浓度为6％、温度90℃、反应时间5h、糖浓度为5％。探究Vc和Fe2+辅助过氧化氢联合降解效果，在这两个体系下，卡拉胶降解速率相较于单独过氧化氢体系大大提高，为后续探究效率更高的卡拉胶降解工艺奠定基础。同时，对在最佳水解条件下制备的卡拉胶寡糖比较分析Sephadex G-50凝胶柱分离和乙醇分级醇沉法分离效果，经Sephadex G-50柱分离得到CF1和CF2两个组分。CF1平均分子量在3～4.7KD，CF2平均分子量为2KD。经三步分级醇沉，分别获得分子量为10KD、2KD、600Da三个卡拉胶寡糖。 2、本实验选取RSM方法优化卡拉胶寡糖硒化反应条件，包括物料比、温度、时间、催化剂，以硒含量(mg/g)为响应值，得到硒含量与物料比、温度、时间、催化剂的多元分析，得到硒化卡拉胶二次回归方程分别为:Y=20.6.0.47A+0.68B-0.14C+0.82D+1.26AB+0.058AC-0.75AD+0.89BC-2.1BD+0.87CD-1.61A2-0.74B2-1.65C2-4.84D2。Y=24.59-0.13A+1.29B-0.66C-0.059D+1.09AB-0.23AC+0.825AD-1.28BC-0.76BD+0.78CD-2.16A2-2.82B2-2.05C2-2.16D2。并对硒化前后卡拉胶寡糖进行体外抗氧化实验，得出硒化后的卡拉胶寡糖，其羟自由基、超氧阴离子、DPPH自由基的清除率均优于卡拉胶寡糖，低分子量寡糖自由基清除率优于高分子量高寡糖。 3、使用改良寇氏法计算硒化卡拉胶寡糖和亚硒酸钠对小鼠的半数致死量(LD50)和95％置信区间，并通过对小鼠体重、死亡情况及病理情况评价硒化卡拉胶和亚硒酸钠的急性毒性。通过LD50比较三者毒性大小，结果显示，10KD硒化卡拉胶寡糖小鼠的LD50值为369mg/kg，是亚硒酸钠的18倍，其95％可信限为341.40mg/kg～404.34mg/kg。2KD硒化卡拉胶实验小鼠LD50值为398mg/kg，是亚硒酸钠的20倍，其95％可信限为339.94mg/kg～466.23mg/kg。亚硒酸钠对实验小鼠的LD50为20.41mg/kg，其95％可信限为13.29mg/kg～31.35mg/kg。结果表明，硒化卡拉胶比亚硒酸钠具有更高的安全性。 4、本试验采用3.5％的DSS成功建立了小鼠结肠炎模型。并从体重、DAI指数、器官指数、炎症因子、血清指标等方面评价硒化卡拉胶对小鼠结肠炎的影响。结果显示，硒化卡拉胶寡糖可改善小鼠的便血和腹泻，减轻肠道炎性细胞浸润和腺体破坏，具有显著的抗结肠炎作用。
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