摘要
乳腺癌已成为全球第一大癌，尽管其临床治疗效果得到很大改善，乳腺癌仍是死亡率最高的恶性肿瘤，而有效治疗乳腺癌的主要障碍在于上皮-间充质转化过程(epithelial-mesenchymal transition,EMT)。因此，亟需有效的靶向治疗来阻断EMT过程。有证据表明白藜芦醇（Resveratrol,Resv)具有抗肿瘤侵袭和转移的作用。然而，Resv抑制乳腺癌侵袭转移的分子机制仍存在争议。通过建立细胞模型和移植瘤模型探讨Resv抑制乳腺癌侵袭转移的分子机制，为乳腺癌的治疗提供新思路。 目的： 建立TGF-β1诱导乳腺癌细胞4T1发生EMT模型，探讨Resv逆转EMT过程抑制肿瘤细胞侵袭和迁移的作用机制。建立小鼠移植瘤肺转移模型，探讨Resv逆转乳腺癌小鼠移植瘤EMT，进而抑制移植瘤肺转移的分子机制。 方法： 1.采用CCK-8和细胞集落实验检测乳腺癌4T1细胞的增殖。 2.采用透射电镜观察自噬结构，激光共聚焦技术检测LC3β、SIRT3和MMP-9的表达。 3.通过划痕实验、Transwell迁移和Matrigel侵袭实验检测4T1细胞的迁移和侵袭能力。 4.采用苏木精-伊红染色、免疫组化、Bouin染色等方法检测小鼠移植瘤的生长和肺转移情况。 5.RT-qPCR和Westernblotting检测MMP-9、自噬相关标记物和EMT标记物的mRNA和蛋白表达。 结果： 1.与空白对照组对比，Resv有效抑制乳腺癌细胞4T1的增殖，且上调细胞的自噬水平；TGF-β1预处理的4T1细胞侵袭转移明显增强，Resv能够显著抑制TGF-β1预处理4T1细胞的EMT过程和侵袭转移。 2.在乳腺癌4T1细胞中，Resv能显著上调SIRT3、AMPK的磷酸化、自噬相关标志物的表达以及抑制TGF-β1介导的4T1细胞的增殖。采用自噬抑制剂3-MA处理4T1细胞或者shRNA沉默4T1细胞中SIRT3基因时，AMPK的磷酸化减少，自噬相关基因和蛋白的表达下调，而MMP-9及EMT标志物表达又再次上调，说明Resv可能通过SIRT3/AMPK途径诱导自噬抑制TGF-β1介导的乳腺癌细胞EMT过程和侵袭转移。 3.构建小鼠移植瘤肺转移模型，发现TGF-β1能够显著诱导乳腺癌小鼠移植瘤的生长和肺转移，而Resv能够显著抑制TGF-β1诱导的肿瘤生长、EMT及肺转移，尤其在80mg/kg和160mg/kg时，抑癌作用最明显，Resv在160mg/kg时对小鼠体重有明显的下降作用，故选择80mg/kg Resv进行后续试验。 4.采用自噬抑制剂3-MA和shRNA SIRT3预处理4T1细胞，接种到小鼠体内，发现小鼠移植瘤结果与细胞实验一致，Resv能显著上调乳腺癌移植瘤SIRT3、AMPK的磷酸化、自噬相关标志物的表达以及抑制TGF-β1介导的乳腺癌小鼠移植瘤的生长、EMT和肺转移。而3-MA和shRNASIRT3抑制了Resv的作用，说明Resv可能通过SIRT3/AMPK途径诱导自噬抑制TGF-β1介导的乳腺癌小鼠移植瘤的EMT、生长和肺转移。 结论： 1.Resv抑制了乳腺癌细胞4T1的增殖和侵袭转移。 2.Resv通过SIRT3/AMPK途径诱导自噬抑制TGF-β1介导的乳腺癌细胞EMT过程和侵袭转移。 3.Resv逆转了乳腺癌小鼠移植瘤的EMT过程，同时抑制了移植瘤的生长和肺转移。 4.Resv通过SIRT3/AMPK途径诱导自噬抑制TGF-β1介导的乳腺癌小鼠移植瘤的EMT、生长和肺转移。
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