目前，由天然蛋白质酶解所得抗氧化肽因其结构相对简单、活性强、易于机体吸收、安全无毒副作用等特点而备受青睐。黑藻属水鳖科黑藻植物，其蛋白质含量较高，是制备抗氧化肽的良好原料。但黑藻蛋白并没有得到充分的利用，高值资源化程度较低。目前，利用黑藻蛋白制备抗氧化肽鲜有报道。因此，本研究以黑藻蛋白为原料，利用酶法水解黑藻蛋白、制备黑藻抗氧化肽，对黑藻抗氧化肽进行分离纯化以及氨基酸序列测定，并研究其体外和细胞内抗氧化活性，以期为黑藻蛋白开发和高值资源化提供依据。具体研究内容如下： 1)首先通过测定胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解物的水解度和抗氧化活性，筛选酶解黑藻蛋白的最佳蛋白酶，然后在单因素试验基础上响应面法优化黑藻蛋白水解条件。试验结果：胰蛋白酶为水解黑藻蛋白的最佳蛋白酶，胰蛋白酶酶解黑藻蛋白的最优条件为：酶底比8.6%、时间5.9h、酶解pH值7.3。最优条件下制备的酶解物对ABTS、DPPH、超氧阴离子和羟基自由基四种自由基的清除率分别为65.9%、40.1%、50.1%、25.3%。 2)黑藻胰蛋白酶酶解物经超滤、Sephadex G-25凝胶色谱柱、半制备反向高效液相分离纯化，所得D-3组分（1000μg/mL）对ABTS、DPPH、超氧阴离子和羟基自由基四种自由基的清除率最高，分别为96.03%、57.32%、58.25%和40.38%。根据D-3组分氨基酸序列鉴定结果筛选理论上抗氧化活性强的2条多肽TCLGER和TCLGPK加以合成，经测定TCLGER和TCLGPK两条多肽的抗氧化活性均较高。 3)建立HepG2细胞的氧化应激模型，经试验确定采用0.8mmol/L H2O2。经不同浓度的多肽TCLGER和TCLGPK干预处理后，氧化损伤的HepG2细胞的存活率显著增加，凋亡率显著减少，ROS含量显著降低，MDA含量显著减少，SOD酶活力、CAT酶活力、GSH-Px酶活力显著增加。经1mg/mL TCLGER和TCLGPK干预处理的受损细胞存活存活率为别93.51%和95.68%，凋亡率分别为2.33%和2.03%，MDA含量分别为2.9和2.4U/mg prot，胞内ROS相对荧光强度分别为40156a.u.和46455a.u.，SOD酶活力分为95.97U/mg prot和98.31U/mg prot；CAT酶活力分为5.87U/mg prot和6.24U/mg prot；GSH-Px酶活力分为1.23U/mg prot和1.01U/mg prot。
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