摘要
研究背景及目的： 近年来，众多研究表明环状RNA(circRNA)在胃癌发生发展的病理过程中扮演重要的角色。Hippo信号通路异常传导是导致胃癌进展的重要因素。其中，Yes相关蛋白1(YAP1)作为Hippo通路的核心成分，在胃癌细胞增殖、转移等方面发挥重要作用。然而，YAP1在胃癌中调控circRNA的机制和功能仍然尚不清楚。本课题研究YAP1/YY1调控circ_015513对胃癌细胞增殖和迁移的影响，并深入研究了其中的分子机制。 研究方法： 运用circRNA芯片测序对YAP1沉默的胃癌细胞进行测序，找出受YAP1调控的circRNAs；经荧光定量PCR验证筛选出受YAP1双向调控最显著的circ_0015513，并检测其在胃癌细胞系和胃癌组织中的circ_0015513表达情况；通过PCR、琼脂糖凝胶实验、Sanger法测序及RNA半衰期实验、RNase R消化实验等验证circ_0015513的生物学特性；通过CCK-8，平板克隆形成，transwell实验和划痕实验以及体内裸鼠成瘤实验探讨circ_0015513在胃癌中的生物学功能；利用生物信息学、细胞学、分子生物学实验探讨YAP1及YYI对circ_0015513的调控作用；双荧光素酶报告基因实验、荧光定量PCR、Sanger法测序等用于筛选circ_0015513下游的miRNAs。 研究结果： 通过circRNA芯片测序在YAP1下调的胃癌细胞中发现了一种新的circRNA(circ_0015513)，其在胃癌组织和胃癌细胞中均呈低表达。敲低circ_0015513的表达可促进胃癌细胞增殖、迁移能力。相反，过表达circ_0015513则抑制胃癌细胞的增殖、迁移以及裸鼠成瘤模型中的肿瘤形成能力。进一步探究机制发现，circ_0015513受到YAP1与转录因子YY1的协同调控，并通过吸附癌基因miR-214-3p和miR-196a-5p从而影响多种信号通路来发挥作用。 研究结论： 本研究发现YAP1下游新的靶分子circ_0015513，首次阐明circ_0015513的生物学特性，发现YAP1通过与转录因子YY1协同作用负向调控circ_0015513，此外circ_0015513通过靶向吸附miR-214-3p和miR-196a-5p抑制胃癌细胞的增殖、迁移。
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