摘要
叶下珠（PhyllanthusurinariaL.）是大戟科叶下珠属一年生草本植物，其主要化学成分有单宁类、木质素类、黄酮类，酚酸类和萜类等，具有抗肿瘤、抗糖尿病、抗菌、抗病毒和保肝护肝等作用。本文使用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法（UPLC-Q-TOF-MS/MS）对叶下珠四个部位（根、茎、叶和果实）之间化学成分差异性进行研究，基于体外α-葡萄糖苷酶抑制试验结合多元数据分析，筛选叶下珠潜在的α-葡萄糖苷酶抑制剂。具体内容如下： 首先，应用UPLC-Q-TOF-MS/MS从叶下珠提取物中初步鉴定出69种化合物，其中35种化合物为根、茎、叶和果实共有成分。通过多元数据分析方法，确定丙戊酸双内酯、表没食子儿茶素-(4β-＞8)-儿茶素、槲皮素3-(4''''-乙酰鼠李糖苷)7-鼠李糖苷和boehmenan分别作为叶、果实、茎和根的生物标记物。体外α-葡萄糖苷酶抑制试验结果显示，果实、根、茎和叶提取物的IC50值分别为0.47±0.01、0.67±0.05、1.03±0.05和5.62±0.68μg/mL，植物全草提取物的IC50值为0.72±0.08μg/mL，所有植物提取物都显示出比阳性对照阿卡波糖（IC50=857.4±61.1μg/mL）更好的抑制活性。其中，表没食子儿茶素-(4β-＞8)-儿茶素、表没食子儿茶素、isostrictinin、柯里拉京、repandusinicacidA和叶下珠素A在果实、根和茎中的相对含量明显高于叶部位，因此这六种化合物被认为对叶下珠的α-葡萄糖苷酶抑制活性具有主要贡献。 其次，应用基于微孔板的α-葡萄糖苷酶生物测定结合离线UPLC-Q-TOF-MS/MS成分鉴定，成功筛选出4种α-葡萄糖苷酶抑制剂。结果表明，叶下珠的4个主要的α-葡萄糖苷酶抑制剂都是单宁类化合物，分别为柯里拉京（IC50=16.46±1.50μM）、老鹳草素（IC50=0.31±0.01μM）、叶下珠素C（IC50=1.50±0.14μM）和叶下珠素A（IC50=3.78±0.35μM）。酶动力学实验表明，柯里拉京为α-葡萄糖苷酶的混合型抑制剂，老鹳草素、叶下珠素C和叶下珠素A为α-葡萄糖苷酶的非竞争性抑制剂。 最后，应用网络药理学方法构建出叶下珠活性成分-糖尿病靶点网络。获得叶下珠成分靶点773个，糖尿病疾病靶点6322个，叶下珠成分-糖尿病交集靶点598个。根据598个交集靶点的KEGG通路富集结果，筛选出41个核心靶点。根据具有的核心靶点数量对叶下珠的活性成分进行排序，获得排名前十二的核心成分被认为是潜在降血糖化合物，分别为叶下珠次素、珠子草素、(+)-virgatusin、phyllanthin、urinatetralin、hinokinin、珠子草次素、(-)-virgatusin、heliobuphthalmin、叶下珠新素、virgatusin和2S,3S-bursehernin。最后，41个核心靶点的GO功能与KEGG通路富集结果表明，叶下珠活性成分很可能是通过影响胰岛素刺激的葡萄糖摄取与储存、糖原的合成、葡萄糖代谢和炎症反应等生物功能和过程，从而发挥降血糖活性。
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