摘要
笃斯越橘(VacciniumuliginosumL.)为杜鹃花科(Erieaceae)越橘属(Vacciniumspp.)多年生灌木，在我国主要分布在大兴安岭地区，浆果蓝紫色，果实中含有多种对人体有益的营养物质，具有增强人体免疫能力、抗氧化、软化血管、降血脂等保健功效，是我国重要的野生蓝莓资源。建立高效的笃斯越橘再生体系和稳定的农杆菌介导的笃斯越橘遗传转化体系，对其后续在基因工程育种上的开发利用具有重要意义。本试验以笃斯越橘品系‘NE-1’组培苗叶片为外植体材料，探究不同激素组合、造伤方式、暗培养时间对叶片诱导愈伤组织的影响:探究合适的愈伤组织增殖培养基，为后续愈伤组织遗传转化打下基础;探究笃斯越橘叶片分化不定芽的两种途径，并筛选合适的激素种类与浓度，为建立高效快速的遗传转化体系建立基础;以无菌组培苗叶片为受体材料，对农杆菌介导的笃斯越橘VubHLH66基因的遗传转化适宜条件进行了研究。 取得的主要研究结果如下: (1)对笃斯越橘品系‘NE-1’叶片再生体系进行优化，愈伤组织诱导培养基的适宜激素组合及浓度为:WPM+3.0mg/LZT+0.2mg/LNAA和WPM+3.0mg/LZT+0.3mg/LIBA，叶片愈伤组织诱导率均为100％，诱导出的愈伤组织颜色绿，质地紧实。添力IIIBA处理诱导的愈伤组织在后续分化能力上强予添加NAA的处理。 (2)影响叶片诱导愈伤组织的其它因素:对四种造伤方式进行筛选，最佳造伤方式为垂直于主叶脉切三刀，保留了叶片分化能力强的部位同时叶片伤口与培养基接触面积最大，提高了诱导出的愈伤组织量;暗培养时间为10d有利于诱导愈伤组织，随着暗培养时间的增加会使叶片诱导出的愈伤组织出现发黄疏松等现象:TDZ在愈伤组织增殖中效果显著，最适增殖培养基为:WPM+3.0mg/LTDZ+0.3mg/LIBA。 (3)不定芽间接再生途径中，单独使用ZT、TDZ效果较差。最佳诱导培养基为:WPM+1.0mg/LTDZ+3.0mg/LZT，诱导率达到81.67％。 (4)叶片离体培养下可直接分化不定芽，不定芽直接诱导培养基为:WPM+0.5mg/LCPPU，不定芽诱导率达N60.00％。 (5)遗传转化体系中，最佳卡那霉素筛选压为10mg/L，头孢霉素浓度为300mg/L;在农杆菌菌液侵染浓度OD600值为0.6，侵染时间为负压状态下侵染2次，每次3min，共培养4d的条件下得到了抗性愈伤组织，抗性愈伤组织获得率为83.33％，同时也不会有农杆菌复染现象出现。
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