摘要
目的 1.研究RAD54L在肝细胞癌中的表达情况。 2.探讨RAD54L在肝细胞癌中的诊断及预后价值。 3.探讨RAD54L在HCC发生发展中可能的生物学功能。 方法 1.运用TIMER数据库分析RAD54L在常见肿瘤中的表达差异。从TCGA数据库下载50例癌旁组织样本和369例HCC组织样本的基因表达谱数据，以及患者的临床特征数据和生存资料。采用Wilcoxon秩和检验比较TCGA数据库中HCC及癌旁样本之间RAD54L基因的表达差异，并分析50例配对HCC及癌旁样本中的表达差异。采用受试者工作特征(receiveroperatingcharacteristic，ROC)曲线判断RAD54L对HCC的诊断价值。按照HCC组织中RAD54L表达量的中位数，把患者分为低表达组(n=184)和高表达组(n=184)，再通过Kaplan-Meier法描绘生存曲线，最后通过Log-rank试验对比二组之间的差别。 2.收集了HCC患者性别、年龄、病理学分级、TNM分期、血管侵犯、血清甲胎蛋白水平(alpha-fetoprotein，AFP)等临床特征，采用χ2检验比较RAD54L基因表达水平在不同临床特征组间的差异，采用单因素Cox回归和多因素Cox回归探索RAD54L表达水平作为预后因素的独立性。 3.使用TIMER数据库分析RAD54L表达水平与HCC组织中免疫细胞浸润丰度的相关性，使用斯皮尔曼(spearman)相关系数来评估相关性。 4.运用基因组富集分析(GeneSetEnrichmentAnalysis，GSEA)软件进行京都基因与基因组百科全书(KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes，KEGG)通路富集分析，预测RAD54L在HCC中涉及的相关通路。 5.使用Linkedomics数据库分析了RAD54L在HCC中的相关基因，并通过DAVID数据库对相关基因进行GO和KEGG通路富集分析。 6.通过GeneMANIA数据库构建RAD54L相关蛋白的互相作用网络。 7.收集8例肝细胞癌样本及配对癌旁样本，通过实时定量PCR和westcmblot实验，比较RAD54L在HCC和癌旁组织间的表达水平。 结果 1.RAD54L在膀胱癌、头颈部鳞状细胞癌、肝细胞癌等多种肿瘤中高表达。与癌旁组织比较，RAD54L基因在HCC中的表现明显升高(P＜0.001)，且在50例配对样本的肝癌组织中的表达也显著上调(P＜0.001)。ROC曲线分析可得，RAD54L基因表达水平对HCC具有显著的诊断价值(AUC=0.954，95％CI:0.926-0.981)。RAD54L高表达组患者的整体生存率更差(P＜0.001)， 2.RAD54L表达水平与患者临床特征的性别(P=0.025)、病理学分级(P＜0.001)相关。多因素Cox回归显示，RAD54L表达水平(P=0.016)和TNM分期(P=0.008)是影响HCC患者预后的独立危险因素。 3.利用TIMER数据库分析表明，RAD54L表达水平和HCC中B细胞(r=-0.461)、CD4+T细胞(r=0.272)、CD8+T细胞(r=0.387)、巨噬细胞(r=0.440)、中性粒细胞(r=0.363)和树突细胞(r=0.499)的浸润水平均呈正相关(均P＜0.05)。 4.RAD54L高表达显著富集于细胞周期、同源重组、DNA拷贝、错配修复、碱基序列剪切修复、单核苷酸剪切修饰等DNA修复相关的通路，以及p53信号通路等与癌症相关的通路。 5.在GO生物过程(BiologicalProcesses，BP)中，RAD54L相关基因主要富集于细胞分裂、DNA复制、DNA修复等过程，在细胞分布（CellularComponents，CC）中主要富集于核质、细胞核、染色体等部位，分子功能（MolecularFunctions，MF）主要富集于单链DNA依赖ATP依赖的DNA解旋酶活性、蛋白结合、DNA结合等方面。KEGG通路富集分析结果显示，RAD54L相关基因主要富集于细胞周期、DNA复制、同源重组等信号通路。 6.EME1、FEN1、RAD51、MAPRE1等蛋白在RAD54L相关蛋白的相互作用网络中发挥着重要作用。 7.实时定量PCR和westernblot实验表明，RAD54L在HCC组织中高表达。 结论RAD54L在HCC中显著高表达，且为HCC患者的不良预后因素。 RAD54L可能参与了HCC的发生发展，有望成为HCC诊断和预后的生物标志物。
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