摘要
研究背景 无精子症(Azoospermia)是男性不育的重要原因之一，大约占所有男性不育病例的25％。临床上根据发病原因将无精症分为梗阻性和非梗阻性两大类，其中前者占据40％。无精症的具体发病机制目前尚不明确，既往研究发现，无精症患者中约有15％的病例伴随有总睾酮(Totaltestosterone，TT)水平的降低，两者之间的关系及作用机制尚不十分确定。睾酮作为男性体内的主要雄激素，由睾丸间质细胞(LeydigCell，LCs)合成和分泌，后者受垂体分泌的黄体生成素(Luteinizinghormone，LH)调节。生成的睾酮扩散到曲细精管和血管中发挥作用。已有研究证实，睾酮在精子发生中起重要作用。正常情况下，睾丸内睾酮的水平比血清中睾酮的水平高50-100倍，这种高水平睾酮的环境正是睾丸内精子发生所必需的。在下丘脑-垂体-性腺轴的调节作用下，睾酮与管周肌样细胞和支持细胞上的雄激素受体结合，发挥其调控男性生殖细胞信号传导途径的功能，进而参与精子发生。当睾酮水平下降时，Stertoli细胞和圆形精子细胞之间的连接蛋白数量减少，导致圆形精子细胞过早地从Stertoli细胞中分离出来，无法分化成细长的精子细胞，从而影响精子细胞的变形。但睾酮水平的变化是否对因梗阻性无精症行体外受精-胚胎移植(invitrofertilization-embryotransfer，IVF-ET)治疗后患者的临床妊娠结局产生影响，目前少有报道。因此，本研究目的是探讨梗阻性无精症患者行体外受精-胚胎移植治疗时，血清睾酮水平对其精子计数和活力及临床妊娠结局的影响及相关机制，为需要辅助助孕治疗的患者提供新的思路和途径。 研究目的 探讨梗阻性无精症患者行体外受精-胚胎移植治疗时，其血清睾酮水平对精子计数和活力及临床妊娠结局的影响及相关机制。 材料和方法 1.以郑州大学第一附属医院生殖医学中心行睾丸穿刺取精术(Testicularspermaspiration，TESA)治疗的434例梗阻性无精症患者作为队列研究数据样本。根据患者血清睾酮水平将其分为两组:高TT组(TT≥264ng/dL)和低TT组(TT＜264ng/dL)，统计分析两组患者一般资料及妊娠结局，并分析影响患者妊娠结局的相关因素。 2.收集梗阻性无精症患者的睾丸组织，以患者睾酮水平分为两组:低TT组(TT＜264ng/dL)和高TT组(TT≥264ng/dL)，采用Westernblot方法检测两组睾丸组织内睾酮生成相关蛋白StAR(Steroidogenicacuteregulatoryprotein)的表达水平;用qPCR方法检测两组睾丸组织StARmRNA的基因表达情况，用透射电镜观察两组睾丸组织内睾丸间质细胞线粒体结构变化;使用免疫荧光法检测两组睾丸组织内精子线粒体膜电位变化及氧化应激情况。 结果 1.患者一般资料特征:高TT组的男方BMI(24.02±3.61VS27.21±4.12)、FSH水平(6.47±6.82VS8.29±8.16)显著低于低TT组;精子数量(48.97±48.58VS19.97±12.02)和活动精子比例(79.0％VS65.9％)显著高于低TT组。 2.无精症患者血清睾酮水平与男方BMI呈显著负相关(R=-0.264，P＜0.001)，与男方LH(R=0.172，P＜0.05)和精子数量(R=0.157，P＜0.05)呈正相关。 3.实验室指标及妊娠结局:高TT组的2PN率(75.4％VS71.3％)、囊胚形成率(54.7％VS47.6％)、临床妊娠率(68.6％VS53.2％)和着床率(53.5％VS33.0％)均显著高于低TT组。 4.Logistic回归分析表明，血清睾酮水平是影响临床妊娠率[OR(95％CI):1.92(1.03-3.55)，P＜0.05]和种植率[OR(95％CI):0.53(0.30-0.95)，P＜0.05]的危险因素。 5.Westernblot结果显示低TT组睾丸组织内StAR蛋白表达水平低于高TT组(P＜0.05)。 6.qPCR结果显示，低TT组StAR基因表达显著下调(P＜0.05)。 7.透射电镜结果显示，低TT组患者睾丸组织内睾丸间质细胞线粒体超微结构受损情况较严重，可见多个模糊、空泡状的线粒体，或膜破裂，或嵴断裂、缺失。 8.免疫荧光结果显示低TT组睾丸组织精子线粒体膜电位显著下降，氧化应激严重。 结论 1.梗阻性无精症患者血清睾酮水平与其BMI呈负相关，与精子数量呈正相关;低睾酮水平(TT＜264ng/dL)与梗阻性无精症患者的2PN受精率、妊娠率和植入率的降低有关。 2.梗阻性无精症患者血清睾酮水平影响妊娠结局与低睾酮水平影响睾丸组织内睾丸间质细胞线粒体结构和功能及增加精子氧化应激水平有关。
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