摘要
目的：观察荔枝核总黄酮（TFL）对人肝癌细胞HepG2细胞在增殖、迁移与侵袭等方面的影响，并测定TFL干预后HepG2内凋亡相关基因的转录水平及相关蛋白表达情况，为荔枝核治疗肝癌的研究提供理论依据。 方法：通过MTT法测定TFL以及阳性组药物（顺铂）对HepG2细胞增殖的影响，并分别计算二者在24h与48h对HepG2的半抑制浓度（IC50），选取最佳的作用时间与浓度进行后续实验。将HepG2细胞分为空白组、阳性组、TFL低剂量组、TFL中剂量组、TFL高剂量组。细胞划痕与Transwell迁移实验测定TFL对HepG2细胞迁移活动的影响；Transwell侵袭实验测定TFL对HepG2细胞侵袭活动的影响。蛋白质印迹法（WesternBlot）测定TFL对HepG2细胞内Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8蛋白质表达的影响；实时荧光定量PCR（RT-PCR）测定TFL对HepG2细胞内上述蛋白质对应基因转录水平的影响。 结果： 1.MTT测定TFL及顺铂的细胞毒性 使用不同浓度的TFL（TFL80μg/ml、TFL120μg/ml、TFL160μg/ml、TFL200μg/ml、TFL240μg/ml）干预HepG2细胞24h、48h后，通过MTT法检测TFL对HepG2细胞的细胞活力的影响。结果显示，在作用24h时，各浓度组细胞活力与空白组比较具有显著差异（P＜0.01），其中160μg/ml、200μg/ml、240μg/ml组的细胞活力均低于50%；在作用48h时，各浓度组细胞活力与空白组比较具有显著差异（P＜0.01），其中120μg/ml、160μg/ml、200μg/ml、240μg/ml组的细胞活力均低于50%。TFL在作用24h时，对于HepG2细胞的IC50为136.7±2.40μg/ml；48h时IC50为106.8±1.11μg/ml。 使用不同浓度的顺铂（1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml、128μg/ml）干预hepG2细胞24h、48h后，通过MTT法检测其对HepG2细胞增殖活性的影响。结果显示，在作用24h时，各浓度组细胞活力除1μg/ml组、2μg/ml组外，与空白组比较均具有显著差异（P＜0.01），其中128μg/ml组的细胞活力低于50%；在作用48h时，各浓度组细胞活力与空白组比较均具有显著差异（P＜0.01），其中8μg/ml组、16μg/ml组、32μg/ml组、64μg/ml组的细胞活力均低于50%。顺铂在作用24h时，对于HepG2细胞的IC50为58.48±2.04μg/ml；48h时的IC50为5.15±0.56μg/ml。后续实验分组如下：空白组、阳性组（顺铂60μg/ml）、TFL低剂量组（70μg/ml）、TFL中剂量组（140μg/ml）、TFL高剂量组（210μg/ml） 2.细胞划痕 药物干预后，各组HepG2细胞迁移的距离（P＜0.01）以及细胞迁移率（P＜0.01）显著低于空白组。其中空白组迁移距离为70.64±8.74μm，迁移率为10.81%±1.75%；阳性组迁移距离为44.55±2.96μm，迁移率为6.78%±0.711%；TFL低剂量组迁移距离为35.44±6.05μm，迁移率为5.8%±1.37%；TFL中剂量组迁移距离为16.80±9.75μm，迁移率为2.74%±1.58%。TFL高剂量组在干预24h后，细胞划痕损毁严重，无法计算其迁移距离，故无结果。 3.Transwell迁移实验 药物干预后，各组HepG2细胞穿膜的数量比空白组显著减少（P＜0.01），空白组穿膜数为244±9个；阳性组穿膜数为118±9个；TFL低剂量组穿膜数为75±3个；TFL中剂量组穿膜数为52±4个；TFL高剂量组穿膜数为40±10个。 4.Transwell侵袭实验 药物干预后，各组HepG2细胞穿膜的数量比空白组显著减少（P＜0.01），空白组穿膜数为148±16个；阳性组穿膜数为85±5个；TFL低剂量组穿膜数为48±7个；TFL中剂量组穿膜数为28±6个；TFL高剂量组穿膜数为21±4个。 5.凋亡相关蛋白表达情况 结果显示：与空白组相比，不同剂量TFL的干预能显著增加Bax蛋白的表达量（P＜0.05）；TFL高剂量组能显著降低Bcl-2蛋白的表达量（P＜0.05），且能显著提高Bax/Bcl-2的比值（P＜0.05）。TFL中剂量能显著提高Caspase-3蛋白与Caspase-8蛋白的表达量（P＜0.05），TFL低剂量能显著提高Caspase-3蛋白的表达量（P＜0.05）。 6.凋亡相关基因转录情况 结果显示，与空白组相比，TFL低剂量、中剂量能显著增加Bax基因的转录水平（P＜0.05）；所有剂量的TFL干预都能显著降低HepG2细胞Bcl-2基因的转录水平（P＜0.01）；TFL中剂量能显著提高Caspase-3基因与Caspase-8基因的转录水平（P＜0.05）；TFL低剂量组尚能显著提高Caspase-3基因的转录水平（P＜0.05）。 结论： 1.TFL可以显著抑制HepG2细胞的增殖过程。 2.TFL可能通过外源性及内源性凋亡途径促进HepG2细胞凋亡。 3.TFL可以显著减弱HepG2细胞迁移与侵袭的能力，可能与TFL对HepG2细胞促凋亡作用相关。
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