NETL
烟酰胺单核苷酸调控HNF-1α/PCSK9/LDLR途径改善高胆固醇血症
刘文凤1
作者信息
摘要
【目的】探讨烟酰胺单核苷酸（NMN）对高胆固醇血症的影响及作用机制。 【方法】（1）采用胆固醇试剂盒检测普通饮食、高脂饮食和NMN处理的高脂饮食喂养的SD大鼠的血清中总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和甘油三酯（TG）的水平。（2）采用CCK-8试剂盒检测不同浓度NMN（0、12.5、25、50、100、200μmol/L）处理Huh7细胞24h的细胞存活率。（3）50mg/LLDL预处理2h使Huh7细胞荷脂，随后加入不同浓度NMN处理细胞24h，采用油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况。（4）先用不同浓度NMN处理Huh7细胞24h，再加入20μg/mLDil-LDL继续培养4h，采用荧光显微镜观察细胞对Dil-LDL的摄取能力。（5）用不同浓度NMN处理Huh7细胞24h，采用qRT-PCR和Westernblot分别检测前蛋白转化酶枯草溶菌素9（PCSK9）、肝细胞核因子1α（HNF1α）、固醇调节元件结合蛋白-2（SREBP-2）、低密度脂蛋白受体（LDLR）mRNA和蛋白的表达。（6）用100μmol/LNMN处理Huh7细胞不同时间（0、4、8、16、24h），采用qRT-PCR和Westernblot分别检测LDLR、SREBP-2、PCSK9和HNF1αmRNA和蛋白的表达。 【结果】（1）胆固醇检测结果显示，高脂饮食喂养的大鼠血清中TC、LDL-C、TG水平相较于普通饮食喂养的大鼠均升高，HDL-C水平无显著影响；高脂饮食喂养的大鼠给予NMN药物治疗后，其血清中TG、TC、LDL水平相较于高脂饮食喂养的大鼠均降低，HDL-C水平无明显影响。（2）CCK-8结果显示不同浓度NMN对Huh7细胞的存活率无明显影响。（3）油红O染色结果显示NMN呈浓度依赖性增加Huh7细胞内橙红色脂滴数量。（4）Dil-LDL检测结果显示NMN呈浓度依赖性增加Huh7细胞对Dil-LDL的摄取。（5）Westernblot及qRT-PCR结果显示，NMN在100和200μmol/L浓度时，可抑制细胞内PCSK9和HNF1α的表达水平，增加LDLR的表达水平，而对SREBP-2的表达水平没有明显影响。（6）Westernblot及qRT-PCR结果显示，用100μmol/L浓度NMN处理Huh7细胞24h后，可抑制细胞中PCSK9和HNF1α的表达水平，升高LDLR的表达水平，对SREBP-2的表达没有明显影响。 【结论】NMN可调控HNF1α/PCSK9/LDLR途径增加肝细胞对胆固醇的摄取，从而降低血浆中高胆固醇水平，改善机体血脂水平。
关键词
高胆固醇血症/烟酰胺单核苷酸/低密度脂蛋白受体/前蛋白转化酶枯草溶菌素9/肝细胞核因子1α/Huh7细胞引用本文复制引用
授予学位
硕士学科专业
基础医学导师
彭娟学位年度
2021学位授予单位
南华大学语种
中文中图分类号
R5