摘要
黑灵芝（Ganodermaatrum，G.atrum）是我国传统的名贵中药材，药食两用真菌。多糖是黑灵芝中的重要活性物质之一，已被证明具有多种生物活性。但黑灵芝多糖对肠道炎症的调节作用及其机制的研究却鲜有报道。本研究以黑灵芝多糖（G.atrumpolysaccharide，PSG-1）为研究对象，探讨其对肠道炎症损伤的保护作用。通过在体内建立DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠模型，探究PSG-1干预对于小鼠的表观指标，与自噬凋亡有关的物理屏障以及树突细胞（dendriticcells，DC）相关的免疫屏障的影响；并在体外水平构建LPS诱导的肠道上皮IEC-6细胞炎症损伤模型，通过RNA测序技术，全面筛查和找寻与PSG-1的保护作用有关的基因，并进一步在蛋白水平上对挑选出的关键途径进行验证。本文所得主要结论如下： 1、DSS构建的急性溃疡性结肠炎小鼠的表观指标与正常小鼠相比会出现显著变化，包括体重骤降，出现便血和腹泻现象，而PSG-1干预有效降低了其DAI指数，缓解了小鼠结肠的重量增加和缩短现象。由切片结果分析可知，DSS显著破坏了小鼠结肠肠道结构，而PSG-1能有效地保护肠道结构的完整性，同时提高结肠炎小鼠结肠内杯状细胞的分泌，较好地保护了小鼠结肠肠道的完整性。 2、结肠炎小鼠的结肠组织中的炎性因子分泌水平异常，PSG-1干预能改善这种紊乱情况，其有效降低了小鼠体内的炎症水平，并且PSG-1干预还上调了DSS诱导的结肠炎小鼠的肠道紧密连接蛋白含量，恢复了被DSS抑制的occludin，claudin-1和Zo-1蛋白的表达。不仅如此，进一步的研究发现结肠炎小鼠结肠组织中的异常活化的DCs在多糖组中得到显著抑制，并且DCs中IL-10的分泌量进一步增加，这表明DCs相关的肠道免疫屏障得到了有效修复。 3、肠道上皮细胞的异常凋亡可能介导或加剧了结肠肠道结构的破坏，而PSG-1干预能有效抑制DSS造成的结肠炎小鼠的结肠过度凋亡。不仅如此，PSG-1还能进一步上调DSS诱导的结肠炎小鼠结肠自噬相关蛋白含量，这在蛋白免疫印迹实验中被证实，且进一步的实验结果表明这种凋亡/自噬的调控作用可能与小鼠体内Akt/mTOR通路的活化程度有关。 4、LPS对IEC-6细胞具有一定的致死效应，PSG-1干预能降低IEC-6细胞死亡水平，同时促进细胞紧密连接蛋白的分泌。RNA测序结果表明，与正常细胞相比，LPS组处理上调的基因数为806，下调基因数为142，而PSG-1干预组与LPS处理组相比，上调和下调的基因数分别为152和211。双GO分析和KEGG分析表明PSG-1干预可能通过提高细胞的迁移能力并降低细胞的凋亡水平来发挥其保护作用。
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