摘要
罗伊氏乳杆菌作为国家卫生部批准的食用级益生菌，具有重要的益生功能，已被广泛应用于食品与发酵行业，但目前研究主要集中于罗伊氏乳杆菌对人类的益生效果评价，对动物肠道健康的免疫调节作用和机制却未有足够的研究和关注。因此，本试验通过对罗伊氏乳杆菌进行益生特性的检验及驯化，再对驯化后的罗伊氏乳杆菌GL005的初始pH和培养基成分进行工艺优化，并进一步观察罗伊氏乳杆菌GL005发酵液对产肠毒素大肠埃希菌致兔腹泻模型的作用，旨在为罗伊氏乳酸杆菌在兽医临床中的应用提供数据支持和理论基础。 本试验分为三个部分:(1)对供试的罗伊氏乳杆菌进行益生性检验及驯化，研究其益生特性;(2)通过单因素试验、正交试验和响应面试验等对罗伊氏乳杆菌GL005的最适pH和培养基成分进行优化，研究罗伊氏乳杆菌GL005的最佳培养条件;(3)将兔分为对照组、模型组、抗生素组、益生菌组共四组(每组n=4);将产肠毒素大肠埃希菌按O.7mL/kg分别给模型组、益生菌组、抗生素组的幼兔腹腔注射造腹泻模型，对照组腹腔注射等量的生理盐水。造模成功后，益生菌组灌胃2.5mL/kg罗伊氏乳杆菌GL005，抗生素组灌胃0.04g/kg诺氟沙星，模型组、对照组灌胃等量生理盐水，进行为期10d的试验，研究罗伊氏乳杆菌GL005的发酵液对幼兔腹泻的治疗效果。 结果显示:(1)提供的罗伊氏乳杆菌对0.3％的胆盐耐受性极差，因此进行胆盐驯化试验，驯化后的罗伊氏乳杆菌GL005在模拟消化液中耐受性强，培养4h存活率仍保持在97％以上。罗伊氏乳杆菌GL005的上清液对四种病原菌均有较好的抑制作用，其中对沙门氏菌的抑制作用最强(18±0.41)mm。罗伊氏乳杆菌GL005能迅速进入对数生长期，在16h达到最高生长点，pH值也在16h后稳定在4.27左右。(2)pH优化结果显示罗伊氏乳杆菌GL005的最适pH为5.8;以MRS为基础培养基，优化得到的增殖培养基为:红糖20.25g/L、葡萄糖10.13g/L、麦芽糖5.06g/L、大豆蛋白胨114.67g/L、酵母浸粉38.22g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、乙酸钠7.5g/mL、磷酸氢二钾2g/L、硫酸镁0.098g/L、硫酸锰0.03g/L、吐温80lg/L，在此培养基中静态培养16h，培养液活菌数为9.8×109CFU/mL，比基础培养基中的活菌数提高了7.54倍，成功实现了罗伊氏乳杆菌GL005的高密度培养。(3)动物试验的结果显示益生菌组兔的免疫器官指数都高于对照组，说明罗伊氏乳杆菌GL005能正向促进兔的免疫器官发育;罗伊氏乳杆菌GL005极显著降低炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α，且降低水平都优于抗生素诺氟沙星;罗伊氏乳杆菌GL005对回肠绒毛的修复效果比抗生素组好，益生菌组兔子的回肠绒毛高度/隐窝深度(V/C)的值在四个试验组中最大。 试验结果表明，驯化后的罗伊氏乳杆菌GL005具有潜在优良益生菌的特性，罗伊氏乳杆菌GL005在优化后的最佳条件中培养活菌数较优化前提高7.54倍;高密度培养的罗伊氏乳杆菌GL005对幼兔腹泻有较好的保健作用。本试验为开发兔源益生菌奠定基础，为罗伊氏乳酸杆菌GL005在兽医临床中的应用提供数据支持和理论基础。
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