摘要
蛋鸡的产蛋性能与卵巢机能密切相关，产蛋末期的蛋鸡卵巢因氧化应激开始自然衰老。褪黑素具有抗氧化和抗凋亡作用。为了研究褪黑素对卵巢与产蛋性能间的影响，本研究以550日龄的海兰褐蛋鸡为研究对象，以常规基础日粮饲养为对照组，在常规基础日粮中添加1mg/kg褪黑素为褪黑素组，饲喂4周。采用ELISA、qPCR、WesternBlot、TEM等方法，进行蛋鸡血液及卵巢中相关激素、受体、蛋白的检测和产蛋性能及蛋品质的分析，研究了褪黑素影响产蛋末期蛋鸡卵巢的影响及其分子机制，主要结果如下： 1、饲喂褪黑素对生产性能的影响。结果显示：随着饲喂时间的延长，对照组的产蛋率从77.99%逐渐下降至76.73%，褪黑素组的产蛋率一直维持在77.50%~78.60%，褪黑素组的闭锁卵泡数量明显少于对照组，组织切片观察显示对照组的卵泡颗粒细胞分布不均匀，畸形发育较多，褪黑素组卵泡颗粒细胞发育正常。表明饲喂褪黑素可以维持产蛋末期蛋鸡卵巢的正常发育，继而维持产蛋率。 2、饲喂褪黑素对卵巢发育的影响。结果显示：添加褪黑素可以显著上调MT1和LHRmRNA的相对表达量，下调FSHRmRNA的相对表达量，促进MT1、MT2和LHR蛋白的相对表达，抑制FSHR蛋白的表达，显著增加血清中MT、LH和E2的含量。同时，饲喂褪黑素可以显著上调抗氧化基因SOD2、GPx3和Prdx3mRNA的表达量，显著提高机体中抗氧化酶CAT、GSH-Px和SOD的酶含量及T-AOC，从而降低机体中因氧化应激积累的ROS和MDA的含量。对卵巢中凋亡因子的转录和蛋白表达水平的检测显示，添加褪黑素可以上调抗凋亡因子Bcl-2mRNA的相对表达量，继而促进抗凋亡蛋白Bcl-2的相对表达，同时下调促凋亡因子Bax和Caspase-3mRNA的相对表达量，继而抑制促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的相对表达。透射电镜观察卵泡颗粒细胞的超微结构，可以观察到褪黑素可以保护颗粒细胞细胞器，减少颗粒细胞的凋亡。表明饲喂褪黑素可以通过调节排卵相关激素受体的转录和表达，进而调节对应激素的含量，来调节排卵，同时提高机体中的抗氧化性，通过抑制促凋亡因子Caspase-3并降低Bax和Bcl-2的转录和表达，减缓卵巢凋亡，延缓机体的衰老。 3、饲喂褪黑素对蛋品质的影响。结果显示：随着饲喂时间的延长，对照组的平均蛋重逐渐下降，从63.98g降至61.90g，破蛋率逐渐增长，从1.68%上升至2.70%。相比对照组，褪黑素组的平均蛋重维持在64.08g左右，破蛋率保持在1.62%左右。同时，褪黑素组的蛋壳厚度比对照组高出0.098mm，蛋壳强度比对照组高出0.36kg/cm2，钙含量比对照组高出0.81%。表明饲喂褪黑素可以上调蛋壳钙含量而增加蛋壳厚度和强度，从而减少破蛋率。 本研究结果表明，褪黑素通过与其特异性受体MT1和MT2结合，提高抗氧化酶基因mRNA的相对表达量而提升抗氧化酶含量，降低ROS和MDA水平，减少衰老对卵巢造成的氧化应激；而后褪黑素通过抑制促凋亡因子Caspase-3和降低Bax/Bcl-2mRNA和蛋白的表达抑制卵巢细胞凋亡，保护卵泡颗粒细胞的生长及细胞器的功能，维持卵泡的发育，从而促进LHR的mRNA和蛋白表达，抑制FSHRmRNA和蛋白表达，使LH含量升高，进而促进排卵，起到延缓卵巢衰老，维持产蛋率的作用。本研究为利用褪黑素延缓卵巢衰老，延长蛋鸡产蛋高峰期提供了理论依据。
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