摘要
近年来，不少学者关注中草药饲料添加剂改善动物健康。目前为止，酶解青蒿在畜禽动物上的应用效果显著，但在水产动物中还未见应用。本实验以大口黑鲈（Micropterus salmoides）为研究对象，研究酶解青蒿对大口黑鲈的生长性能、血清生化指标、抗氧化能力、肠道和肝脏组织学、肠道微生物菌群和糖脂代谢的影响，为酶解青蒿在水产动物上的应用提供理论基础，为大口黑鲈人工配合饲料的优化提供科学指导。 实验一：酶解青蒿对大口黑鲈生长、血清生化指标、抗氧化能力、肝脏和肠道健康的影响。将大口黑鲈（初始体重：14.75±0.50g）随机分为6组，投喂饲料酶解青蒿水平分别为对照组0g/kg（EA0）、0.25g/kg（EA0.25）、0.5g/kg（EA0.5）、1g/kg（EA1）、2g/kg（EA2）和4g/kg（EA4）的6组等氮等脂的饲料，进行了为期8周的实验。实验结果表明：1）随着饲料酶解青蒿水平的升高，各组的饲料效率、成活率、蛋白质效率、摄食率、脏体比无显著性差异（P＞0.05），而大口黑鲈的终末体重、增重率和特定生长率呈先升后降的趋势，并均在饲料添加0.25g/kg、0.5g/kg和1g/kg的酶解青蒿时显著高于对照组（P＜0.05）。各酶解青蒿添加组之间的蛋白质沉积率无显著差异（P＞0.05），而肥满度呈先升后降的趋势，并在酶解青蒿水平为0.25g/kg和0.5g/kg时显著高于对照组（P＜0.05）。当饲料添加的酶解青蒿水平低于1g/kg时，对大口黑鲈肝体比无显著影响（P＞0.05），随着酶解青蒿水平进一步升高，肝体比显著降低（P＜0.05）。饲料中添加酶解青蒿对大口黑鲈全鱼体组成中的水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分均无显著性影响（P＞0.05）。2）酶解青蒿对大口黑鲈血清白蛋白和谷丙转氨酶无显著影响（P＞0.05），总蛋白呈先升后降的趋势（P＜0.05），并在EA2组达到最高；总胆固醇和甘油三酯含量呈先降后升的趋势（P＜0.05），并均在EA0.5组达到最低；葡萄糖含量呈先降后升的趋势（P＜0.05），在EA2组最低；高密度脂蛋白和低密度脂蛋白呈现完全相反的趋势，均在EA0.5组达到最高和最低（P＜0.05）；谷草转氨酶随酶解青蒿水平的升高呈先降后升的趋势，但酶解青蒿添加组均显著低于对照组（P＜0.05）。3）饲料酶解青蒿水平对大口黑鲈血清、肝脏和肠道的总抗氧化能力均有显著影响（P＜0.05），随着酶解青蒿水平的升高，三者均呈现先升高后降低的趋势，并在EA0.5组达到最高（P＜0.05）；血清超氧化物歧化酶活性不受酶解青蒿水平的影响（P＞0.05），血清中的过氧化物酶和肝脏和肠道中的超氧化物歧化酶和过氧化物酶活性均随着酶解青蒿水平先升高后降低，在EA0.5组达到最高（P＜0.05），血清和肝脏中的丙二醛和蛋白质羰基呈相反趋势（P＜0.05）；肠道中的丙二醛含量无显著变化（P＞0.05），蛋白质羰基含量先降低后升高，在EA1组达到最低（P＜0.05）。在EA0.5组，肝脏Nrf2、CuZnSOD和CAT的mRNA表达量显著高于对照组（P＜0.05），肝脏Keap1的mRNA表达量显著低于对照组，但对肝脏HO-1和GPx的mRNA表达量无显著影响（P＞0.05），对肠道内上述基因的表达量均无显著影响（P＞0.05）；在EA4组，肝脏Nrf2、CuZnSOD、HO-1和GPx的mRNA表达量显著高于对照组（P＜0.05），肝脏Keap1的mRNA表达量显著低于对照组，但对肝脏CAT的mRNA表达量无显著影响（P＞0.05），显著提高了肠道内Nrf2、CAT、HO-1和GPx的mRNA表达量，对肠道Keap1和CuZnSOD基因的mRNA表达量无显著影响（P＞0.05）。4）当饲料中酶解青蒿水平为0.25~1g/kg时，肝细胞边界清晰，大小均匀，排列紧密，肝细胞空泡化现象有所缓解。肠道形态指标均呈现上升趋势，并在酶解青蒿水平为1g/kg时达到最高值（P＜0.05）。5）酶解青蒿水平为0.5g/kg时，显著降低了肠道菌群的多样性（P＜0.05），在一定程度上影响了大口黑鲈肠道菌群的组成。综上所述，酶解青蒿可以提高大口黑鲈生长性能，通过提高抗氧化基因的表达提高大口黑鲈的抗氧化能力，同时改善大口黑鲈肝脏和肠道组织形态学而保障肝脏和肠道健康。建议大口黑鲈饲料中酶解青蒿适宜添加量为0.33g/kg。 实验二：酶解青蒿对大口黑鲈糖脂代谢的影响。本实验在实验一的基础上分析了酶解青蒿对大口黑鲈脂质合成、脂质氧化、糖酵解和糖异生关键基因的mRNA表达水平的影响。实验结果表明：1）在EA0.5组，酶解青蒿的添加显著提高了脂肪酸氧化关键因子CPT-1的mRNA水平（P＜0.05）对其他脂代谢相关基因的表达均无显著影响（P＞0.05）；在EA4组，酶解青蒿的添加均显著提高了大口黑鲈SREBP1-c、ACCα、FASN、HMGCR、PPARα和ACCβ基因的表达（P＜0.05），降低了CPT-1的转录水平（P＜0.05）。2）在EA0.5组，酶解青蒿的添加显著提高了FoxO1和PFK的mRNA水平（P＜0.05）对其他糖代谢相关基因的表达均无显著影响（P＞0.05）；在EA4组，FoxO1、PEPCK、FBP、GK和PK的转录水平显著高于对照组（P＞0.05），CREB和G6P与对照组无显著差异（P＞0.05）。以上实验表明，适宜剂量的酶解青蒿能够促进大口黑鲈脂代谢和糖代谢。
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