摘要
目的： 绝经后骨质疏松症(Postmenopausal osteoporosis，PMOP)是一种常见的发生于绝经女性的全身性疾病，其主要特征为骨微观结构受损、骨密度降低且易发生脆性骨折。成骨分化受抑制是其主要发病机制之一；Wnt/β-catenin信号通路为参与骨代谢的经典信号通路；PMOP主要中医病机为肾精亏虚，且中医认为“脾化精而充肾”，健脾要方香砂六君子汤又具有健脾益气化痰之功效，因此本文通过“脾化精而充肾”理论探讨健脾要方香砂六君子汤预防绝经后骨质疏松症的主要机制，以明确其是否与Wnt/β-catenin信号通路相关。 材料与方法： 采用随机数字表法对SD雌性大鼠进行随机分组，适应性饲养一周后进行OVX造模，共分为6组：空白组、模型组、阳性对照组（仙灵骨葆胶囊组）、香砂六君子汤低剂量组、香砂六君子汤中剂量组、香砂六君子汤高剂量组，造模后2周开始灌胃给药，连续给药8周后取材，对股骨组织进行骨组织生物力学检测；microCT扫描机分析骨小梁等微观组织形态结构，检测骨小梁数量、厚度、分离度及骨密度等参数；血清骨代谢指标检测（ELISA）：检测血清中骨代谢物ALP、PINP及β-CTx水平；通过切片HE染色检测骨微观结构形态及骨细胞形态、数量；免疫组织化学（IHC）分析：抗体包括（Runx2、Wnt及β-catenin抗体）。 结果： 1.生物力学检测：空白组最大荷载力最高，阳性对照组其次，香砂六君子汤组高剂量＞香砂六君子汤中剂量组＞香砂六君子汤低剂量组，模型组最低，发现香砂六君子汤可显著提高股骨最大荷载力（p＜0.05）； 2.microCT扫描机分析显示：各组股骨组织骨体积由高到低排序为空白组＞仙灵骨葆胶囊组＞香砂六君子汤高剂量组＞模型组；各组股骨组织骨密度由高到低排序为空白组＞仙灵骨葆胶囊组＞香砂六君子汤高剂量组＞模型组；各组股骨组织皮质骨体积检测结果显示：各组间对比无明显差异；各组股骨组织皮质骨密度检测结果显示：模型组较空白组明显降低，香砂六君子汤组、仙灵骨葆胶囊组均与模型组无明显差异；各组股骨组织骨小梁体积由高到低排序为空白组＞仙灵骨葆胶囊组＞香砂六君子汤高剂量组＞模型组。各组股骨组织骨小梁密度由高到低排序为：空白组＞仙灵骨葆组＞香砂六君子汤高剂量组＞模型组，香砂六君子汤高剂量组与模型组无明显差异，提示香砂六君子汤可明显恢复骨微观结构（p＞0.05）； 3.血清骨代谢指标检测：①ALP、P1NP表达空白组最高，阳性对照组其次，香砂六君子汤组高剂量组＞香砂六君子汤中剂量组＞香砂六君子汤低剂量组，模型组最低；②β-CTX表达模型组最高，空白组最低，阳性对照组与空白组无明显差异，香砂六君子汤组低剂量组＞香砂六君子汤中剂量组＞香砂六君子汤高剂量组，发现香砂六君子汤可显著上调血清中ALP、PINP含量，下调β-CTx含量水平（p＜0.01）； 4.HE染色显示：空白组:骨小梁连接紧密、排列整齐密集、结构呈网状;模型组:骨小梁明显变细、排列稀疏紊乱、断裂、大部分结构呈非网状;香砂六君子汤低剂量组:骨小梁变粗、有断裂、网状结构不明显；香砂六君子汤中剂量组:骨小梁较粗、分布较密集，变粗程度及密集程度低于高剂量组及仙灵骨葆胶囊组;香砂六君子汤高剂量组:骨小梁明显增粗、可见网状结构、排列致密整齐;仙灵骨葆胶囊组:骨小梁排列紧密、可见明显清晰网状结构，较模型组骨小梁明显增粗、整齐，发现香砂六君子汤可有效提高骨小梁百分比（p＜0.05）； 5.免疫组织化学（IHC）分析显示：大鼠股骨中Runx2、Wnt及β-catenin表达情况均为空白组＞阳性对照组＞香砂六君子汤高剂量组＞香砂六君子汤中剂量组＞香砂六君子汤低剂量组＞模型组，发现香砂六君子汤能够促进调节骨形成的关键蛋白Runx2表达和抑制骨吸收的重要抗体Wnt及β-catenin蛋白表达（p均＜0.05）。 结论： 通过动物实验研究发现，香砂六君子汤可以显著增强SD雌性OVX大鼠股骨的骨小梁连续性及稳定性，促进骨形成，改善骨密度，从而预防PMOP，其通路机制可能为Wnt/β-catenin信号通路受激活从而上调Runx2表达来促进成骨分化。
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